| 人源类溶菌酶蛋白4在受精过程中的作用及酶学性质研究 |
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| 引用本文： | 黄鹏,钱能,杜望春,施尉珺,孙庆文,张宁. 人源类溶菌酶蛋白4在受精过程中的作用及酶学性质研究[J]. 中华男科学杂志, 2018, 0(2) |
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| 作者姓名： | 黄鹏 钱能 杜望春 施尉珺 孙庆文 张宁 |
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| 作者单位： | 上海健康医学院临床医学院;上海健康医学院基础医学院;复旦大学生命科学院; |
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| 摘 要： | 目的:对人源类溶菌酶蛋白4(LYZL4)在受精过程中的作用和重组蛋白的酶学性质进行研究,从而揭示LYZL4的生理功能。方法:细胞免疫荧光法检测LYZL4在精子细胞上的亚细胞定位,RT-PCR分析精子表面LYZL4的来源,通过精子穿透试验分析LYZL4在受精过程中的作用。构建真核重组表达载体p PIC9K-LYZL4,转化毕赤酵母GS115菌株后,甲醇诱导表达;甲壳素亲和层析和凝胶过滤层析从发酵上清中纯化重组LYZL4蛋白(rLYZL4),通过Western印迹进行验证。ELISA测定rLYZL4的透明质酸结合能力,分光光度法测定rLYZL4的胞壁质酶活性、透明质酸酶活性和自由基清除能力。结果:LYZL4免疫荧光定位于成熟精子头部的顶体膜上,RTPCR检测表明精子表面的LYZL4蛋白来源于睾丸和附睾的分泌,兔抗LYZL4多克隆抗体可明显抑制精卵结合。毕赤酵母表达系统成功表达了rLYZL4,酶活性分析显示rLYZL4无胞壁质酶和透明质酸酶活性,但能够结合透明质酸,并具有较强的自由基清除能力。结论:LYZL4由睾丸和附睾分泌后定位于成熟精子头部的顶体膜上,可在精卵结合过程中发挥作用,其还能够结合透明质酸并清除自由基,提示LYZL4可能作为一种多功能分子在精子保护及精卵结合过程中发挥作用。
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| 关 键 词： | 人源类溶菌酶蛋白4 顶体 精卵结合 透明质酸 自由基 |
The role of human lysozyme-like protein 4 in fertilization and its enzymatic properties |
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