胰岛素样生长因子Ⅱ基因转染骨髓基质细胞后的生物学活性 |
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引用本文: | 肖骏,王岩.胰岛素样生长因子Ⅱ基因转染骨髓基质细胞后的生物学活性[J].中国临床康复,2005,9(30):50-52,i0001. |
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作者姓名: | 肖骏 王岩 |
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作者单位: | 解放军总医院骨科,北京市100853 |
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基金项目: | 国家重点八六三课题资助(2003AA205140) |
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摘 要: | 目的:将人胰岛素样生长因子Ⅱ基因的真核表达载体pcDNA3-胰岛素样生长因子Ⅱ,转染兔骨髓基质细胞,使其在该细胞中瞬时表达,并观察该表达载体促进骨髓基质细胞增殖的生物学活性。方法:实验于2004—08/12在解放军总医院骨科研究所完成。①骨髓基质细胞培养:取4周龄雄性新西兰大白兔1只用于骨髓基质细胞提取。培养的第2代细胞用于实验。②基因转染:将人胰岛素样生长因子Ⅱ基因的真核表达载体pcDNA3-胰岛素样生长因子Ⅱ,转染兔骨髓基质细胞,对照组则为空载体pcDNA3。③转染与非转染骨髓基质细胞胰岛素样生长因子ⅡmRNA表达:采用反转录-聚合酶链反应检测。④转染细胞的增殖状况检测:采用四甲基偶氮唑盐法测定各组吸光度(A)值(A值越大表示细胞增殖越强)。结果:①转染与非转染骨髓基质细胞胰岛素样生长因子ⅡmRNA表达:琼脂糖凝胶电泳的结果显示,未转染和转染pcDNA3质粒的细胞仅出现内参照β-肌动蛋白的条带,而转染的细胞出现胰岛素样生长因子Ⅱ和β-肌动蛋白的两条带。(2)转染细胞的增殖状况:24,48,72h各时间点单纯骨髓基质细胞组和转染胰岛素样生长因子Ⅱ的骨髓基质细胞组细胞增殖均显著高于与对照组(72h:1.233&;#177;0.45,1.575&;#177;0.45,0.482&;#177;0.04,P〈0.01);转染胰岛素样生长因子Ⅱ的骨髓基质细胞组显著性高于单纯骨髓基质细胞组(P〈0.01)。结论:将具有多重生物学效应的胰岛素样生长因子Ⅱ基因转入软骨组织工程最佳种子细胞-骨髓基质细胞,明确胰岛素样生长因子Ⅱ促进骨髓基质细胞增殖分化效应,并初步证实了其促进种子细胞的成骨活性。
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关 键 词: | 胰岛素样生长因子Ⅱ 基因 转染 基因疗法 骨髓细胞 |
文章编号: | 1671-5926(2005)30-0050-03 |
收稿时间: | 05 3 2005 12:00AM |
修稿时间: | 2005-05-032005-07-05 |
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