vMIP-ⅡN端肽对趋化因子受体CXCR4表达调控的机制研究

目的:探讨病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ（vMIP-Ⅱ）对乳腺癌细胞CXCR4表达的影响及分子机制。方法:设计并合成扩增CXCR4核心启动子基因序列，构建荧光素酶报告载体，酶切鉴定；通过检测报告基因荧光素酶活性反映病毒巨噬细胞炎性蛋白N端21肽（NT21MP）对CXCR4启动子的作用；通过荧光定量PCR技术和Western blot检测CXCR4干扰或过表达、HER-2干扰，以及miRNAs抑制剂和类似物转染后相关基因及miRNAs表达；采用磺酰罗丹明B（SRB）染色法检测细胞增殖活性，PI染色法检测细胞周期，Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡。结果:NT21MP下调CXCR4的表达，并上调miR-125b、miR-135a和miR-146a的表达（P < 0.05~P < 0.01）；NT21MP降低CXCR4核心启动子的活性；SP1为CXCR4核心启动子高频结合转录因子，miR-135a可下调SP1的表达（P < 0.01）；过表达CXCR4上调HER-2表达（P < 0.01），而干扰CXCR4表达则下调HER-2表达（P < 0.01）；miR-125b可下调HER-2的表达（P < 0.01）；HER-2表达下调诱导miR-146a的表达；miR-146a抑制CXCR4表达（P < 0.01）；相对于空白对照组，miR-146a和miR-135a均可抑制细胞增殖，阻断细胞周期，并诱导凋亡（P < 0.01）。结论:NT21MP通过诱导miR-125b、miR-135a和miR-146a负调控CXCR4的表达，从而抑制乳腺癌细胞的增殖能力，为NT21MP应用于乳腺癌患者的治疗提供了理论基础。