| 人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 张巧,赵国强,刘红梅,宫亚欧,丁兰萍,薛乐勋,杨胜利. 人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建[J]. 郑州大学学报(医学版), 2005, 40(3): 411-413 |
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| 作者姓名： | 张巧 赵国强 刘红梅 宫亚欧 丁兰萍 薛乐勋 杨胜利 |
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| 作者单位： | 郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室,郑州,450052;郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,郑州,450052;郑州大学基础医学院食管癌研究室,郑州,450052;郑州大学细胞生物学研究室,郑州,450052 |
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| 基金项目： | 教育部“十五”211工程重点学科建设项目(教重办2002第2号) |
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| 摘 要： | 目的：构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT，并观察融合蛋白的表达。方法：用RT-PCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段，与pGEM-T Easy连接，转化感受态大肠杆菌JM109，经蓝-白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落，用EcoRⅠ酶切获取目的片段，并与EcoRⅠ酶切过的pGEX-4T-1质粒连接，重组子转化BL21感受态大肠杆菌，PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega 2．0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX-4T-1融合蛋白表达，用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Western blot鉴定，薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果：PCR扩增等方法证实，人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功，其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98．73％，氨基酸序列同源性为99．68％。Western blot检出GST-hTERT融合蛋白，其表达量达28．4％。结论：成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。
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| 关 键 词： | 人端粒酶逆转录酶 原核表达载体 重组质粒 |
| 修稿时间： | 2005-02-04 |
Construction of human telomerase reverse transcriptase prokaryotic expression vector |
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| ZHANG Qiao,ZHAO Guoqiang,LIU Hongmei,Gong Ya'ou,Ding Lanping,XUE Lexun,YANG Shengli. Construction of human telomerase reverse transcriptase prokaryotic expression vector[J]. Journal of Zhengzhou University: Med Sci, 2005, 40(3): 411-413 |
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| Authors: | ZHANG Qiao ZHAO Guoqiang LIU Hongmei Gong Ya'ou Ding Lanping XUE Lexun YANG Shengli |
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