| U6嵌和型Maxizyme对肝癌突变抑癌基因p53的抑制作用 |
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| 引用本文： | 孔心涓,林菊生,宋宇虎,金由辛.U6嵌和型Maxizyme对肝癌突变抑癌基因p53的抑制作用[J].中华肝脏病杂志,2005,13(10):759-762. |
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| 作者姓名： | 孔心涓 林菊生 宋宇虎 金由辛 |
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| 作者单位： | 1. 430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所
2. 中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（30171061） |
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| 摘 要： | 目的探讨U6嵌和型Maxizyme对肝癌突变抑癌基因p53的抑制作用。方法应用计算机设计针对肝癌突变抑癌基因p53(mtp53)249位密码子(AGG→AGT)Maxizyme(Mz)的基因片段,构建其真核表达载体,使抗mtp53的Mz嵌于U6表达系统中,细胞外由T7 RNA聚合酶转录,细胞内由RNA聚合酶Ⅲ高效转录。检测Mz在细胞外对mtp53的切割效率。在LipofectamineTM2000介导下转染肝癌细胞MHCC97,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Mz对肝癌细胞mtp53的抑制作用,western blot分析mtp53蛋白表达水平,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察肿瘤细胞的生长情况。结果在细胞外,Mz可特异性切割靶基因mtp53,切割效率为42%,而野生型p53(wtp53)没有被切割。RT-PCR和western blot检测结果提示转染Mz的MHCC97内mtp53 mRNA和蛋白(5.3 ×104)表达均明显下降,转染Mz的MHCC97增殖速度明显降低。结论U6表达系统能高效启动核酶等小分子RNA的转录,U6嵌和型Maxizyme在细胞内外均可特异性抑制mtp53表达,抑制肝癌细胞增殖,有望开发为肝癌基因治疗的新方法。
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| 关 键 词： | 癌 肝细胞 基因 p53 基因疗法 Maxizyme 肝癌细胞增殖 抑癌基因p53 抑制作用 癌突变 逆转录聚合酶链反应 RNA聚合酶Ⅲ |
| 收稿时间： | 2004-01-11 |
| 修稿时间： | 2004年1月11日 |
Inhibition of mutant-type p53 by a chimeric U6 maxizyme in hepatocellular carcinoma cell lines |
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| KONG Xin-juan,LIN Ju-sheng,SONG Yu-hu,JIN You-xin.Inhibition of mutant-type p53 by a chimeric U6 maxizyme in hepatocellular carcinoma cell lines[J].Chinese Journal of Hepatology,2005,13(10):759-762. |
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| Authors: | KONG Xin-juan LIN Ju-sheng SONG Yu-hu JIN You-xin |
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| Institution: | Institute of Liver Diseases, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Carcinoma hepatocellular Genes p53 Gene therapy Maxizyme |
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