口腔鳞状细胞癌稳定过表达蛋白酶体激活因子PA28γ细胞株的构建 |
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作者姓名: | 辛川 王冏珂 李敬 曾昕 |
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作者单位: | 口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心 四川大学华西口腔医院黏膜病科,成都610041;口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心 四川大学华西口腔医院黏膜病科,成都610041;口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心 四川大学华西口腔医院黏膜病科,成都610041;口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心 四川大学华西口腔医院黏膜病科,成都610041 |
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基金项目: | 国家重点研发计划重点专科课题(2017YFC0840100);国家重点研发计划重点专科课题(2017YFC0840107);国家自然科学基金(81472533);国家自然科学基金(81672675);国家自然科学基金(281771081) |
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摘 要: | 目的 构建蛋白酶体激活因子PA28γ过表达的口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞稳转株,并验证其过表达PA28γ的效率。方法 首先采用聚合酶链反应(PCR)克隆PA28γ基因至pLOV.CMV.cherry.2A.EF1a.PuroR慢病毒载体中,采用PCR和DNA测序比对分析进行鉴定;其次采用293T细胞包装病毒;然后采用病毒感染OSCC细胞构建PA28γ稳定过表达细胞株。最后利用免疫印迹技术检测OSCC细胞稳转株中PA28γ表达的水平。结果 DNA测序结果显示成功构建PA28γ过表达慢病毒载体构建;荧光结果显示,PA28γ过表达慢病毒成功感染OSCC细胞,并呈现樱桃红色荧光;免疫印迹结果显示,构建的PA28γ稳定过表达细胞显著提高细胞中PA28γ表达水平。结论 PA28γ过表达慢病毒载体能显著提高细胞中PA28γ蛋白表达水平,为进一步研究PA28γ对OSCC发生发展的影响及其机制提供了稳定的细胞转染载体。
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关 键 词: | 口腔鳞状细胞癌 PA28γ 慢病毒 过表达载体 过表达稳转株 |
收稿时间: | 2019-04-16 |
修稿时间: | 2019-11-05 |
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