丹参酮联合大黄素通过NF-κB信号通路抑制肝细胞癌细胞中MMP-9的表达

目的:探究丹参酮联合大黄素对人肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响的潜在分子机制。方法:将购买的HCC细胞系Hep G2进行复苏,分为Emodin(18μmol/L,EMO组)、Tan(10μmol/L,Tan组)、Emodin+Tan(Emodin:18μmol/L;Tan:10μmol/L,EMO+Tan组)和保持未处理(Ctrl组)分别培养,孵育后,对各组Hep G2细胞株行MTT检测,评估各组细胞增殖能力;使用流式细胞术检测,观察各组细胞凋亡率;使用细胞侵袭实验,观察各组细胞侵袭能力;使用细胞划痕修复试验,观察各组细胞迁移能力;使用qRT-PCR、荧光素酶测定检测各组细胞内MMP-9mRNA表达和启动子活性情况;使用蛋白免疫印迹实验分析细胞内MMP-9蛋白表达情况;使用Ch IP分析NF-κB与人MMP-9启动子的结合活性。结果:MTT检测结果发现,低浓度丹参酮联合大黄素组(EMO+Tan组)细胞增殖显著低于Ctrl组;流式细胞术检测结果观察到EMO+Tan组细胞凋亡率显著高于Ctrl组;细胞侵袭实验结果显示,EMO+Tan组细胞侵袭数量显著低于Ctrl组;细胞划痕修复试验结果显示,EMO+Tan组细胞迁移数量显著低于Ctrl组;qRT-PCR和荧光素酶测定结果显示,EMO+Tan组MMP-9mRNA和启动子活性显著低于对照组;蛋白免疫分析结果显示EMO+Tan组MMP-9蛋白表达显著低于Ctrl组;ChI P结果显示,EMO+Tan组NF-κB与MMP-9启动子的结合活性显著降低。上述各组实验中,低浓度EMO组和Tan组与Ctrl组相比均无显著差异性。结论:在低浓度时,丹参酮联合大黄素可以通过抑制NF-κB信号通路来抑制细胞内MMP-9表达,从而抑制HCC肿瘤细胞在体外的生长、侵袭和迁移。