应用激光显微分离技术在骨肉瘤组织原位筛选噬菌体肽库

目的：将激光显微分离（laser capture microdissection，LCM）技术应用于噬菌体表面呈现肽库的筛选过程，建立一种可以直接在天然组织中筛选肽库的方法。方法：将新鲜人骨肉瘤组织块在噬菌体肽库溶液振荡孵育后制成组织冰冻切片，免疫组化染色检测噬菌体在组织中的浸润扩散。改进常规LCM切片处理方法，以冻干法替代酒精/二甲苯法脱水，以期在LCM操作过程中提高切片上噬菌体的存活率。LCM法分离摄取骨肉瘤切片上的肿瘤靶细胞，转染回收这些细胞上特异结合的噬菌体。滴定法检测所筛选的噬菌体对特异性细胞的亲和力。结果：利用LCM技术，可以由肿瘤冰冻切片上收集到足够的与特异性噬菌体短肽，应用于噬菌体表面呈现肽库筛选。经过3轮筛选后所获得的噬菌体与人骨肉瘤组织的特异性亲和力提高16倍。结论：本研究首次将LCM技术应用于噬菌体表面呈现肽库的筛选，可以使我们直接在新鲜人肿瘤组织中筛选与特定细胞群甚至单个细胞亲合的短肽；同时又避免了天然组织中其他杂质细胞的污染，为研制细胞特异性导向载体提供了一个新的途径。