| 抗氧化反应元件调控的EGFP在HepG2细胞中的表达 |
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| 作者姓名： | 徐海荣 汪步海 武文娟 戴尔峋 刘丽琴 焦寒凝 张西志 |
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| 作者单位： | 徐海荣 (扬州大学临床医学院放疗中心,江苏 扬州,225001)； 汪步海 (扬州大学临床医学院放疗中心,江苏 扬州,225001)；武文娟 (扬州大学临床医学院放疗中心,江苏 扬州,225001)；戴尔峋 (扬州大学临床医学院放疗中心,江苏 扬州,225001)；刘丽琴 (扬州大学临床医学院放疗中心,江苏 扬州,225001)；焦寒凝 (扬州大学临床医学院放疗中心,江苏 扬州,225001)； 张西志 (扬州大学临床医学院放疗中心,江苏 扬州,225001)； |
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| 基金项目： | 教育部博士点基金项目(项目编号：20113250120006)江苏省高校自然科学基金项目(项目编号：11KJB360010)扬州大学科技创新培育基金项目(项目编号：2011CXJ082) |
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| 摘 要： | 目的:采用增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,用HepG2细胞构建可敏感、快速、方便地筛选出Ⅱ相酶诱导剂的评价体系。方法:通过分子生物学技术,将TK启动子克隆到pEGFP-N1上,再将人工合成的抗氧化反应元件(ARE)序列插入TK启动子上游,并转染入HepG2细胞株,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养。结果:重组载体经酶切和PCR鉴定,发现有TK和ARE-TK基因特异条带。DNA测序发现ARE-TK-EGFP框架正确。转染细胞在荧光显微镜下可见大量的绿色荧光颗粒,该细胞经不同浓度已知Ⅱ相酶诱导剂tBHQ作用后,与EGFP表达量有剂量效应关系。结论:ARE调控的EGFP在HepG2细胞中成功表达。为进一步高通量筛选Ⅱ相酶诱导剂奠定了基础。
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| 关 键 词： | 抗氧化反应元件 增强绿色荧光蛋白 Ⅱ相酶 基因重组 |
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