| 一种无RNA纯化步骤TaqMan RT-PCR方法用于快速检测登革病毒 |
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| 引用本文： | 郑夔,洪烨,李小波,黄吉城,师永霞,幸芦琴,相大鹏,郭波旋,胡龙飞. 一种无RNA纯化步骤TaqMan RT-PCR方法用于快速检测登革病毒[J]. 华南预防医学, 2008, 34(3): 6-10 |
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| 作者姓名： | 郑夔 洪烨 李小波 黄吉城 师永霞 幸芦琴 相大鹏 郭波旋 胡龙飞 |
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| 作者单位： | 广东检验检疫技术中心卫生检疫实验室,广东广州,510700;云浮出入境检验检疫局 |
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| 基金项目： | 国家质量监督检验检疫总局资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 建立一种简便、快速的登革病毒核酸检测方法.方法 设计合成LNA探针,替代MGB探针,建立一步法TaqMan RT-PCR方法,并用已知的登革病毒标准毒株进行方法的优化;用商品化的纯化试剂盒和简单的热释放法获取登革病毒细胞培养液和模拟含登革病毒血清中RNA,以优化的TaqMan RT-PCR方法进行检测,比较有或无RNA纯化步骤检测的敏感性和重复性.结果 LNA探针TaqMan RT-PCR有较好的PCR扩增效率(104%)、较广的线性范围(10 0～10-7样品稀释度)、较高的敏感性(0.003TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于4.53%),新方法检测经简单热释放RNA的细胞培养液和模拟含登革病毒血清中登革病毒也有较高的敏感性(0.03TCID50/反应)和较好的重复性(CV值小于6.36%).结论 新型LNA探针可替代MGB探针用于TaqMan RT-PCR反应,简便的热释放RNA方法结合高敏感性的TaqMan RT-PCR可满足登革病毒快速检测的需要.
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| 关 键 词： | 登革病毒 逆转录聚合酶链反应 LNA探针 |
A TaqMan RT-PCR assay without RNA purification for rapid detection of dengue virus |
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| ZHENG Kui,HONG Ye,LI Xiao-bo,et al.. A TaqMan RT-PCR assay without RNA purification for rapid detection of dengue virus[J]. South China JOurnal of Preventive Medicine, 2008, 34(3): 6-10 |
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| Authors: | ZHENG Kui HONG Ye LI Xiao-bo et al. |
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| Affiliation: | ZHENG Kui,HONG Ye,LI Xiao-bo,et al. Guangdong Inspection , Quarantine Technology Center Health Quarantine Lab,Guangzhou 510700,China |
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| Abstract: | ObjectiveTo develop a simple and rapid detection method for nucleic acid of dengue virus. MethodsA LNA probe was designed and synthesized to replace the MGB probe for the established TaqMan RT-PCR assay, and then optimized with a known dengue virus standard strain. A commercial RNA extraction kit and simple heat-release method were used to obtain dengue virus RNA from cell culture supernate and simulated dengue virus serum, which was detected by the optimized TaqMan RT-PCR assay. The results without RNA pur... |
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| Keywords: | Dengue virus RT-PCR LNA probe |
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