编码弓形虫表面抗原P30、P22复合基因真核表达载体的构建 |
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引用本文: | 郭岚,古钦民,李瑛,周怀瑜,赵群力,丛华,何深一.编码弓形虫表面抗原P30、P22复合基因真核表达载体的构建[J].中国寄生虫病防治杂志,2005,18(1):8-11. |
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作者姓名: | 郭岚 古钦民 李瑛 周怀瑜 赵群力 丛华 何深一 |
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摘 要: | 目的 构建编码弓形虫RH株表面抗原P30、P22复合基因的真核表达重组质粒,为进一步表达融合蛋白及研制核酸疫苗做准备。方法 用弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/氯仿法抽提弓形虫基因组DNA;用PCR技术从基因组DNA中扩增编码表而抗原P30、P22的基因片段,分别重组入pMD18T载体中。将pMD18-T载体中的P30、P22基因片段分别酶切,定向克隆入pUC18克隆载体中,pUC18-P30-P22中的P30P22片段经酶切、纯化后,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,用酶切、PCR及测序的方法对重组子进行鉴定。结果 从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出特异的P30及P22片段;大小均与预测值相符;克隆pUC18-P30P22重组质粒的酶切片段分别与P30、P22基冈大小一敛:经亚克隆、筛选鉴定获得了pcDNA3.1-P30-P22重组质粒,所测P30、P22基因序列与文献报道一致。结论 成功构建弓形虫pUC8-P30P21重组质粒和pcDNA3.1-P30-P22重组质粒,为研制弓形虫DNA疫苗奠定了基础。
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关 键 词: | 弓形虫属 P30基因 P22基因 克隆 |
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