| 摘 要： | 目的:通过检测小鼠结肠组织中Rho激酶(ROCK),E-钙黏蛋白(E-cadherin)及转化生长因子-β(TGF-β)相关指标变化,探讨氧化苦参碱通过RhoA/ROCK信号通路介导上皮-间充质转化,防治溃疡性结肠炎(UC)及其相关癌变的机制。方法:48只SPF级Balb/c雄性小鼠随机分为正常组,模型组,氧化苦参碱低、中、高剂量组(25,50,100 mg·kg~(-1)),Rho激酶抑制剂(Y-27632)组(10 mg·kg~(-1))。采用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用1周法制备UC模型,腹腔注射的方式给药,正常组和模型组腹腔注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)。自造模起,每天记录小鼠体质量、粪便的性状、隐血及肉眼血便情况,连续给药1周,第8天处死全部小鼠,评估UC小鼠疾病活动指数(DAI);对小鼠结肠进行病理学评分;采用透射电镜观察各组小鼠结肠组织超微结构变化;酶联免疫吸附法测定法(ELISA)检测结肠组织TGF-β含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测小鼠结肠组织Rho激酶-1(ROCK-1),Rho激酶-2(ROCK-2),E-cadherin,TGF-β蛋白及mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组光镜下见黏膜及黏膜下层大量炎性细胞浸润、腺体排列紊乱、伴有不同程度肠黏膜缺损、甚有溃疡形成,电镜下见肠上皮细胞表面微绒毛稀疏,细胞连接间隙增宽,杯状细胞减少,细胞器肿胀,DAI评分显著升高(P 0. 01),结肠组织ROCK-1,ROCK-2蛋白和mRNA含量均显著升高(P 0. 01),结肠长度显著降低(P 0. 01),结肠组织E-cadherin,TGF-β蛋白和mRNA表达显著减少(P 0. 01);与模型组比较,各治疗组小鼠光镜及电镜下病理表现均有不同程度的改善,DAI评分显著降低(P 0. 01),结肠长度显著增加(P 0. 01),结肠组织ROCK-1,ROCK-2蛋白和mRNA表达水平显著下降(P 0. 01),E-cadherin,TGF-β蛋白和mRNA表达显著上升(P 0. 01);与氧化苦参碱中剂量组比较,氧化苦参碱低、高剂量组ROCK-1,ROCK-2蛋白和mRNA含量均明显升高(P 0. 05,P 0. 01),TGF-β和E-cadherin蛋白和mRNA含量显著降低(P 0. 01)。结论:氧化苦参碱可通过下调Rho激酶表达,上调E-cadherin和TGF-β表达,诱导肠上皮细胞凋亡,介导上皮-间充质转化,从而达到缓解溃疡性结肠炎的功效。
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