当归芍药散含药血清对ET-1诱导的HSC-T6细胞内p-MLCⅡ，MLCⅡ蛋白表达的影响

目的:探究内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对大鼠肝星状细胞HSC-T6内磷酸化肌球蛋白轻链Ⅱ(phosphorylated myosin light chainⅡ,p-MLCⅡ),肌球蛋白轻链Ⅱ(myosin light chainⅡ,MLCⅡ)蛋白表达的影响及当归芍药散(Danggui Shaoyao San)含药血清对其的干预作用。方法:将HSC-T6细胞种板后,各组每孔加入DMEM和终体积分数分别为2. 5%,5%,10%,15%,20%的空白大鼠血清,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定HSC-T6细胞的活力,筛选出适合的大鼠血清浓度范围;将细胞分为空白血清组(5%,10%,15%)和当归芍药散含药血清组(5%,10%,15%),酶联免疫吸附测定(ELISA)检测基础状态下细胞培养上清液中ET-1的含量;细胞分为空白血清组(10%),当归芍药散含药血清低、中、高剂量组(5%,10%,15%),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测基础状态下细胞培养上清液中ET-1 mRNA的水平;将细胞分为空白血清组(10%),模型组(10%),当归芍药散含药血清低、中、高剂量组(5%,10%,15%),Y-27632抑制剂组(100μmol·L~(-1)),除空白血清组外,其余各组均加入10 nmol·L~(-1)ET-1诱导HSC-T6细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ET-1诱导的HSC-T6细胞中p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达。结果:选用血清浓度为5%,10%,15%作为含药血清浓度。与空白血清组比较,当归芍药散含药血清组明显降低基础状态下ET-1含量,ET-1 mRNA相对含量(P 0. 05,P 0. 01)。与空白血清组比较,模型组细胞内p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达水平均显著升高(P 0. 01);与模型组比较,当归芍药散含药血清各剂量组及Y-27632抑制剂组均可明显下调p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01)。结论:当归芍药散含药血清可能通过下调ET-1的含量,抑制ET-1的自分泌,从而下调p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达。