c-Met siRNA对肝细胞生长因子诱导的人胆管癌QBC939细胞增殖的影响

目的:近年来胆管癌的发病率和病死率呈上升的趋势,5年生存期低于5%,因此亟需利用现代生物技术探索新的治疗方法.探讨针对肝细胞生长因子(HGF)受体c-Met的RNA干扰对人胆管癌(CCA)QBC939细胞增殖的影响. 方法:构建针对人c-Met基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的人CCA QBC939细胞,应用MTT法检测细胞增殖,Western blot检测c-Met、细胞周期素(Cyclin)D1和A表达以及磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)和胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路活化. 结果:c-Met siRNA显著抑制c-Met蛋白表达,且随着其浓度的增加,c-Met蛋白表达逐渐下降,500nmol/L c-Met siRNA对c-Met蛋白表达的抑制率达65%.HGF刺激24 h,细胞增殖是对照组的4.54倍,100nmol/L c-Met siRNA预处理即显著抑制HGF诱导的细胞增殖,其抑制率达26%,且随浓度增加,其抑制作用逐渐增强,500nmol/L c-Met siRNA对HGF诱导的细胞增殖的抑制率达85%.HGF刺激4h,PI3K和Akt的活性即显著增强,分别是对照组的4.09和4.54倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的P13K/Akt活化,500 nmol/L c-Met siRNA几乎完全抑制HGF诱导的PI3K/Akt活化.HGF显著诱导人CCAQBC939细胞ERK1/2活化,50ng/ml HGF刺激4 h,磷酸化ERK1/2表达是对照组的3.63倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的ERK1/2活化.HGF显著诱导人CCA QBC939细胞细胞周期素D1和A表达,分别是对照组的2.83和3.16倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的细胞周期素D1和A表达. 结论:针对人c-Met基因的RNA干扰可有效阻断人CCA QBC939细胞c-Met表达,并通过阻断P13K/Akt和ERK1/2信号通路活化而抑制HGF诱导的细胞增殖.

Effects of c-Met siRNA on the growth of human bile duct carcinoma QBC939 cells stimulated by hepatic growth factor