| TGF-β3真核表达载体转染骨髓基质干细胞促进其向软骨分化的实验研究 |
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| 引用本文： | 郑东,杨述华,袁晓梅,李进,冯勇,徐亮,梅荣成.TGF-β3真核表达载体转染骨髓基质干细胞促进其向软骨分化的实验研究[J].中国矫形外科杂志,2007,15(6):455-458. |
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| 作者姓名： | 郑东 杨述华 袁晓梅 李进 冯勇 徐亮 梅荣成 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科,武汉,430022
2. 华中科技大学同济医学院基础学院免疫系,武汉,430030 |
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| 摘 要： | 目的]构建生长转化因子(TGF-β3)含绿色加强绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP-TGF-β3,然后用该质粒转染骨髓基质干细胞(Marrow stromal cells,MSCs)并促进MSCs向软骨方向分化。方法]用RT-PCR法从大鼠的胚胎组织中提取TGF-β3的DNA全长,首先连接到pMDl8-T载体,扩增、纯化后经测序公司测序确定插入目的基因序列的正确性,然后再用带有EcoRI、PstI内切酶的引物,从pMD18-T将TGF-β3的全长再次扩增出来,最后将带有酶切位点的TGF-β3的全长插入到真核质粒pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-TGF-β3。体外培养大鼠MSCs,应用阳性脂质体将pIRES2-EGFP-TGF-β3转染到MSCs中,24h后在荧光显微镜下观察蛋白的表达,流式检测MSCs的转染效率;Westen Blot检测TGF-β3蛋白的表达;之后进行MSCs细胞球团培养,分别于第7、14、21、28d检测软骨基质胶原Ⅱ,胶原X和Aggrecan的表达,同时用甲苯胺蓝检测蛋白聚糖(proteoglycan)的表达。结果]测序结果和酶切鉴定结果表明成功的构建了pIRES2-EGFP-TGF-β3质粒,转染MSCs之后,转染的效率达30%。Westen Blot结果表明TGF-β3获得了成功的表达,在接下来的细胞球团培养过程中,转染后MSCs被成功诱导向软骨分化。
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| 关 键 词： | 转化生长因子β3克隆 软骨分化 软骨组织工程 软骨修复 真核细胞 骨髓基质干细胞 |
| 文章编号： | 1005-8478（2007）06-0455-04 |
| 收稿时间： | 2006-08-24 |
| 修稿时间： | 2006-11-27 |
Effect of TGF-β3 gene transfer on chondrogenesis of marrow stromal stem cells |
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| ZHENG Dong, YANG Shu-hua,YUAN Xiao-mei ,et al..Effect of TGF-β3 gene transfer on chondrogenesis of marrow stromal stem cells[J].The Orthopedic Journal of China,2007,15(6):455-458. |
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| Authors: | ZHENG Dong YANG Shu-hua YUAN Xiao-mei |
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| Institution: | Department of Orthopedics, Union Hospital, Tongfi Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | transforming growth factor-beta 3 cloning chondrogenesis tissue engineering of cartilage repair of cartilage eukaryotic cell marrow stromal cells |
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