| 永生化小鼠小胶质细胞P2X4siRNA靶点的筛选 |
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| 引用本文： | 彭伟,张咸伟,田学愎,邓乾,姚文龙,曹菲,田玉科.永生化小鼠小胶质细胞P2X4siRNA靶点的筛选[J].华中科技大学学报(医学版),2008,37(5). |
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| 作者姓名： | 彭伟 张咸伟 田学愎 邓乾 姚文龙 曹菲 田玉科 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科,武汉,430030 |
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| 摘 要： | 目的 筛选永生化小鼠小胶质细胞特异性P2X4siRNA.方法 转染FAM-siRNA16 h后,激光扫描共聚焦显微镜检测永生化小鼠小胶质细胞转染效率;将3条特异性siRNA经lipofectamine 2000介导转染永生化小鼠小胶质细胞;72 h后半定量RT-PCR观察干扰前后P2X4 基因mRNA水平表达,比较对应不同位点的三对siRNA片段对P2X4基因的干扰效果,分析RNA干扰的特异性,从中筛选出特异性最高的一条siRNA;转染该序列72 h后Western blot检测P2X4基因蛋白表达.结果 激光扫描共聚焦显微镜显示转染效率达80%;三对siRNA片段中siRNA-F1的沉默效率最高,最大干扰效率达72.2%;Western blot显示转染siRNA-F1后P2X4基因蛋白表达下调.结论 siRNA-F1可有效下调永生化小鼠小胶质细胞中P2X4 基因mRNA表达水平,并且能明显下调P2X4蛋白表达.
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| 关 键 词： | 小胶质细胞 P2X4基因 RNA干扰 |
Screening of P2X4siRNA on Immortalized Mice Microglia |
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