胰岛素样生长因子1基因转染肌源性干细胞及表达

目的检测胰岛素样生长因子1（IGF-1）转染肌源性干细胞效果及IGF-1基因表达情况。方法取失神经骨骼肌，分离、接种培养肌源性干细胞。取第3代细胞，用Lipofectamine介导，将重组质粒PAD—CMV—IGF-1转染肌源性干细胞。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，酶联免疫吸附试验检测培养上清液中IGF-1的浓度变化，Westernblot及实时荧光定量RT-PCR检测细胞内IGF-1及其mRNA的表达，流式细胞仪检测细胞周期。结果在转染2周内细胞表达绿色荧光蛋白。转染后上清液中分泌IGF-1浓度上升，72h达到高峰为（32．2±5．3）ng／ml，后其浓度逐渐下降。Westernblot证实有与IGF-1大小相符条带出现。实时荧光定量RT—PCR证实mRNA表达明显增高，第3天达到高峰。流式细胞检测表明转染后肌源性干细胞S期比例增加。结论PAD—CMV—IGF-1质粒可有效转染肌源性干细胞。