栀子拮抗细菌脓毒症有效成分京尼平苷的研究

目的：脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征，是烧伤、创伤和感染性疾病患者的常见并发症，其中内毒素（LPS）是介导细菌脓毒症的重要病原体相关分子模式。重组人活化蛋白C作为FDA批准的第一个用于治疗重度脓毒症的药物，经过6年的应用评估，其疗效已被否定，迄今脓毒症治疗仍缺乏有效药物。本文通过从中药栀子中提取分离具有中和LPS作用的有效成分京尼平苷，研究其拮抗细菌脓毒症的活性。方法：以LPS活性中心LipidA为靶点，采用生物传感器技术，从传统清热中药中筛选出具有LipidA结合活性的栀子，进而利用现代色谱技术分离出具有拮抗LPS活性的单体京尼平苷，通过鲎试剂法检测京尼平苷对LPS的体内外中和作用；RT-PCR法检测京尼平苷对LPS诱导巨噬细胞TLR4和TNF—αmRNA表达的影响；ELISA法检测京尼平苷对LPS刺激RAW264．7细胞产生细胞因子（TNF—α）的抑制作用；观察京尼平苷对脓毒症模型小鼠的保护作用。结果：京尼平苷在体外对LPS具有直接的中和作用，并呈现出较好的剂量效应关系：同时可剂量依赖的抑制LPS刺激引起的RAW264．7细胞的活化（TLR4和TNF-αmRNA的表达下调，细胞因子TNF-α的产生减少）；在体内可降低LPS血症模型动物血中的LPS水平；对致死剂量热灭活大肠埃希氏菌攻击的小鼠具有显著的保护作用。