| hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 王明雁,李磊,李大金,孟毅,朱影. hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达[J]. 中国免疫学杂志, 2002, 18(7): 445-450 |
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| 作者姓名： | 王明雁 李磊 李大金 孟毅 朱影 |
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| 作者单位： | 复旦大学附属妇产科研究所生殖免疫研究室,上海,200011 |
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| 基金项目： | 上海市自然科学基金项目（00ZB14058）资助，教育部博士学科点专项科研基金（9941）资助，卫生部优秀青年人才专项科研基金（97031）资助 |
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| 摘 要： | 目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3 cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的CMV启动子下游,以产生pcDNA3-hCGβ-C3d3。将此融合质粒转染瞬时表达系统 COS-7细胞表达相应产物。其无血清培养上清液用免疫亲和层析法纯化重组蛋白。Raji细胞免疫细胞化学技术鉴定表达产物准确性。结果:真核细胞瞬时表达系统 COS-7细胞经转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒后,可分泌hCGβ重组蛋白。1.0×105个 COS-7细胞转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,经72h培养后,可产生152ng的hCGβ重组蛋白,且表达量随时间延长而增高。在有血清培养基中的分泌量明显高于无血清培养基。同时,用Raji细胞免疫细胞化学分析表达产物显示,纯化的表达产物既有C3d结合受体活性,亦有hCGβ抗原性。结论:利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接,构建了pc-DNA3-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒,为提高hCGDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | hCGβ C3d3 COS-7 |
| 文章编号： | 1000-484X(2002)07-0445-06 |
Expression of fusion protein of hCGβ with murine C3d3 in eukaryotic cell |
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