下调NLRP3在2型糖尿病中表达对胰岛素抵抗模型脂肪细胞炎症反应及自噬的影响

【摘要】 目的 探讨寡聚化结构域样蛋白受体3（NLRP3）在2型糖尿病（T2DM）中表达及其对胰岛素抵抗（IR）模型脂肪细胞炎症反应和自噬的影响。 方法 ELISA检测T2DM患者及正常对照组（Normal组）血清中NLRP3表达水平；体外诱导前脂肪细胞3T3-L1分化为成熟脂肪细胞，油红O染色进行鉴定；使用地塞米松诱导并建立3T3-L1脂肪细胞的IR模型，葡萄糖氧化酶法进行鉴定；采用siRNA技术转染3T3-L1脂肪细胞，并将细胞分为四组：si-NC组（转染si-NC的3T3-L1细胞）、si-NLRP3组（转染si-NLRP3的3T3-L1细胞）、IR-si-NC组（在IR模型中转染si-NC的3T3-L1细胞）、IR-si-NLRP3组（在IR模型中转染si-NLRP3的3T3-L1细胞）。分别使用RT-PCR、ELISA、葡萄糖氧化酶法及Western blot实验检测上述各组细胞中NLRP3 mRNA表达，促炎因子白介素1β（IL-1β）、白介素18(IL-18)和自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、p62的表达。 结果 NLRP3在T2DM患者血清中的表达水平较Normal组显著增加（P＜0.01）；RT-PCR实验显示与si-NC组相比，si-NLRP3与IR-si-NLRP3组的3T3-L1细胞中NLRP3 mRNA的表达均显著降低（P＜0.05），而IR-si-NC组细胞中NLRP3 mRNA的表达明显升高（P＜0.05）;ELISA实验结果表明IR模型中脂肪细胞对促炎因子IL-1β、IL-18的表达显著增加，而下调IR模型脂肪细胞NLRP3表达可明显抑制脂肪细胞对IL-1β、IL-18的分泌（P＜0.05）；葡萄糖氧化酶法检测结果显示，IR模型中的脂肪细胞对胰岛素摄取能力显著下降，而下调IR模型中脂肪细胞NLRP3表达可明显促进其对葡萄糖摄取（P＜0.05）；自噬相关蛋白的Western blot实验检测结果显示IR模型中细胞的自噬标志性分子LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin-1蛋白均显著降低，p62蛋白明显增加，而下调IR模型中脂肪细胞NLRP3表达可显著降低上述蛋白的变化趋势（P＜0.05），即促进细胞的自噬水平。 结论 NLRP3在T2DM患者血清中的表达显著增加，通过下调IR模型中脂肪细胞的NLRP3表达能够有效降低细胞对炎症因子IL-1β、IL-18的分泌，促进其对葡萄糖的摄取和增加细胞的自噬水平。

The effect of down regulation of NLRP3 expression on inflammatory response and autophagy of adipocytes in insulin resistance model