| 含EB病毒LMP2A毕氏酵母表达载体的构建与表达LMP2A蛋白的检测 |
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| 引用本文： | 陈云,姚堃,孙华,彭光勇,丁传林,谢芳艺,周峰.含EB病毒LMP2A毕氏酵母表达载体的构建与表达LMP2A蛋白的检测[J].南京医科大学学报,2004,24(3):297-300. |
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| 作者姓名： | 陈云 姚堃 孙华 彭光勇 丁传林 谢芳艺 周峰 |
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| 作者单位： | 南京医科大学微生物和免疫学系,江苏南京210029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(N030170880)，江苏省“九五”攻关课题(BJ98100) |
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| 摘 要： | 目的：构建EB病毒潜伏膜蛋白2A的表达载体，并在真核生物毕氏酵母细胞中表达。方法：用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ将含LMP2A全长编码基因的质粒PCIcc双酶切后，克隆到毕氏酵母载体PICZαA中，构建重组表达质粒pPICαA—LMP2A。pICZαA—LMP2A经SAC Ⅰ酶切线性化，采用氯化锂的方法转化毕氏酵母GS115，经YPD平板Zeocine抗性筛选获得LMP2A阳性克隆的菌株，用PCR鉴定阳性酵母转化子，并分别将阳性的酵母转化子在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达，表达产物进行SDS—PAGE电泳和westem—b10tting分析。结果：重组质粒pPICZαA—LMP2A经PCR和酶切鉴定为阳性。SDS—PAGE电泳和west-em-blotting结果显示表达蛋白的相对分子量为54Kda，与预计值相同。结论：构建了LMP2A毕氏酵母表达载体，并在酵母细胞中成功表达。
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| 关 键 词： | EB病毒 LMP2A基因 毕氏酵母 氯化锂 酵母细胞 肿瘤免疫疗法 |
| 文章编号： | 1007-4368(2004)03-0297-04 |
| 修稿时间： | 2003年10月22 |
Expression of LMP2A Gene of Epstein-Barr Virus in Pichia pastoris |
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| CHEN Yun,YAO Kun,SUN Hua,PENG Guang-yong,DING Chuan-lin,XIE Fang-yi,ZHOU Feng.Expression of LMP2A Gene of Epstein-Barr Virus in Pichia pastoris[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2004,24(3):297-300. |
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| Authors: | CHEN Yun YAO Kun SUN Hua PENG Guang-yong DING Chuan-lin XIE Fang-yi ZHOU Feng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Epstein-Barr Virus LMP2A gene Pichia pastoris expression |
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