T细胞条件性敲除Spi1基因小鼠的繁育及鉴定 |
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作者姓名: | 王卉卉 朱向玲 吴旭铭 张慧茹 周园园 王安琪 刘崇 涂佳杰 |
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基金项目: | 安徽省高校杰出青年科研项目(编号:2022AH020052); |
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摘 要: | 目的 繁育T细胞条件性敲除Spi1基因的小鼠并对其进行鉴定,为进一步探索Spi1编码蛋白PU.1的作用提供研究基础。方法 将Lck-Cre小鼠与Spi1flox/flox小鼠进行杂交繁育,通过聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,筛选出基因型为Lck-Cre×Spi1flox/flox的小鼠即为T细胞条件性敲除Spi1基因的纯合子小鼠。使用磁珠分选脾脏T淋巴细胞,并应用Westernblot、实时荧光定量PCR(qPCR)及流式细胞术检测PU.1在T细胞中的敲除效率。结果 Lck-Cre×Spi1flox/flox小鼠基因稳定遗传。与Spi1flox/flox小鼠相比,Lck-Cre×Spi1flox/flox小鼠脾脏T细胞中的PU.1表达水平显著降低。结论该研究应用Cre/LoxP系统和CRISPR/Cas9技术成功构建了T细胞条件性敲除Spi1基因小鼠,为后续研究PU.1在T细胞相关疾病中的具体作用提供了可靠的动物模型。
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关 键 词: | Spi1 Cre/LoxP系统 CRISPR/Cas9技术 T细胞 PU.1 条件性敲除 |
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