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C反应蛋白单体的制备,鉴定及其初步应用研究
作者姓名:吴鑫  陈孚中  邹钰  王俊宏
作者单位:1. 南京医科大学第一附属医院产科;2. 南京医科大学第一附属医院心脏科
基金项目:国家自然科学基金项目(No.NSFC82170269);
摘    要:C反应蛋白单体参与了机体的炎性反应,在多种无菌性炎症及动脉粥样硬化形成过程中起着重要作用,因此获得高纯度具有免疫原性的C反应蛋白单体(Monomeric CRP,mCRP)对于mCRP的诊断及指导靶向mCRP的治疗具有重要的临床应用价值。研究将CRP五聚体(Pentameric CRP,pCRP)在解离缓冲液(40 mmol/L Tris+500 mmol/L NaCl+2 mmol/L EDTA+8 mol/L脲)中解离60 d后采用Superdex 200 Increase10/300G分子筛分离解离产物,利用SDS-PAGE电泳及免疫印迹(WB)鉴定mCRP蛋白的纯度及免疫原性,化学发光免疫分析法研究急性心肌梗死患者血清样品中mCRP与pCRP交叉反应性;SDS-PAGE及WB结果显示pCRP在解离缓冲液中解离60 d后可部分解离为mCRP,进一步采用分子筛分离后分段收集分离产物,SDS-PAGE及WB显示解离获得的mCRP在相对分子质量约23 000位置见单一明显条带,提示采用解离+分子筛方法可获得高纯度具有免疫原性的mCRP,随后作者采用化学发光免疫分析法建立的检测体系提示获...

关 键 词:C反应蛋白单体(mCRP)  CRP五聚体(pCRP)  分子筛  定量  化学发光免疫分析  免疫原性
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