戊型肝炎病毒基因Ⅲ型病毒样颗粒的表达与抗原性分析

目的观察戊型肝炎病毒（HEV）基因Ⅲ型（GⅢ）ORF2全长片段在昆虫细胞中的表达和病毒样颗粒（VLP）的装配情况，对纯化的VLP进行抗原性分析。方法应用含Ⅲ型HEV全长ORF2的pVL 1393-GⅢ ORF2质粒，体外与杆状病毒同源重组后，转染昆虫细胞Sf9细胞与在rrn5细胞中表达，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和western blot检测表达产物，超速离心法纯化，检测是否形成病毒样颗粒，用免疫电镜和ELISA分析病毒样颗粒的抗原性。结果Ⅲ型ORF2全长基因在Sf9和Tn5昆虫细胞中表达可获得72、64、58、56、53 kD的蛋白质，在Tn5细胞中有56、53kD的蛋白质分泌到培养液。纯化后可获得6．7mg／mL的蛋白质，分子量为53kD，电镜观察发现了直径约为25nm的VLP，浮密度为1．291g／cm^3。检测基因Ⅳ型戊肝感染病人血清，GⅢ VLP与GⅠVLP具有同样的灵敏度，均能检测到滴度分别为1：204800和1：102400的IgM和IgG抗体。同时GⅢ VLP在戊肝病人血清和IgM阳性猪血清孵育发生凝集反应。结论戊型肝炎病毒基因Ⅲ型ORF2全长基因片段可以在昆虫细胞表达系统高效表达。形成的VLP具有HEV病毒颗粒类似的抗原活性，可用于制备HEV抗体诊断试剂和开发预防用疫苗。