| CXCR4基因shRNA表达质粒的构建及筛选鉴定 |
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| 引用本文： | 胡志洪,王晓婓,国春龙,宋新灵.CXCR4基因shRNA表达质粒的构建及筛选鉴定[J].中国老年学杂志,2013,33(17):4192-4194. |
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| 作者姓名： | 胡志洪 王晓婓 国春龙 宋新灵 |
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| 作者单位： | 1. 白城中心医院,吉林 白城,137000
2. 吉林大学第二医院
3. 吉林省申邦细胞工程研究所 |
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| 基金项目： | 吉林省自然科学基金(项目编号：201015175) |
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| 摘 要： | 目的 构建编码CXCR4mRNA的短发卡样RNA(shRNA)表达质粒用以筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体.方法 根据GenBank中登录的CXCR4基因的核苷酸序列,应用shRNA设计软件设计并合成4条短发卡shRNA的oligo DNA,构建shRNA重组质粒.采用酶切电泳和测序方法进行鉴定.将鉴定后的CXCR4基因shRNA重组质粒经脂质体介导转染胶质瘤U251细胞,24 h后经RT-PCR筛选有效的shRNA重组质粒.结果 构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出目的条带,DNA测序结果与理论序列完全一致.RT-PCR检测显示,转染pG-PU6/GFP/Rac 1-421的U251细胞CXCR4基因mRNA的转录水平下降.结论 成功构建CXCR4基因shRNA表达质粒,并筛选出效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pGPU6/GFP/Rac1-421.
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| 关 键 词： | CXC趋化因子受体4 RNA干扰 U251细胞 |
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