| 用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在SH-SY5Y细胞中持续稳定高表达 |
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| 引用本文： | 陈绍春,邹智荣,李国萍,叶频,范艳,李跃敏.用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在SH-SY5Y细胞中持续稳定高表达[J].昆明医学院学报,2013,34(7):4-7. |
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| 作者姓名： | 陈绍春 邹智荣 李国萍 叶频 范艳 李跃敏 |
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| 作者单位： | 陈绍春 (昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系,云南昆明,650500)； 邹智荣 (昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系,云南昆明,650500)； 李国萍 (第三附属医院头颈外科,云南昆明,650118)； 叶频 (昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系,云南昆明,650500)； 范艳 (昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系,云南昆明,650500)； 李跃敏 (昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系,云南昆明,650500)； |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(项目编号：81260195),云南省自然科学基金资助项目(项目编号：2010ZC110) |
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| 摘 要： | 目的 探讨用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在人神经母细胞瘤株SH-SY5Y中持续稳定高表达的可行性,为深入研究Gnaq在脑衰老及相关疾病中的作用及分子机制奠定基础.方法 通过NCBI网站查询Gnaq的编码序列并设计相应的克隆引物,以高表达Gnaq的HepG2细胞的cDNA为模板,PCR扩增得到带适宜酶切位点的目的基因,将目的基因连接入慢病毒载体PLIG,转染感受态细胞,筛选阳性克隆,测序鉴定后包装慢病毒,转染SH-SY5Y细胞；于转染后24 h、第5代时检测GFP荧光表达率；检测第3代、第5代PLIG-Gnaq-SH-SY5Y细胞内Gnaq的转录水平.结果 荧光检测显示SH-SY5Y细胞的转染效率接近100％,此表达效率可持续至转染后第5代；RT-PCR检测显示转染后第3代、第5代的PLIG-Gnaq-SH-SY5Y细胞内Gnaq呈明显的高转录水平,未明显受冻存的影响.结论 利用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在SH-SY5Y细胞内长期稳定高表达具有可行性,可用PLIG-Gnaq-SH-SY5Y作为模型细胞深入研究Gnaq基因在神经细胞中扮演的角色及相关机制.
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| 关 键 词： | 慢病毒载体 Gnaq基因 SH-SY5Y细胞 过表达 |
Persistant and Stable Over-Expression of Gnaq in SH-SY5Y Cell Line by Means of Lentivector Transfection Technique |
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| CHEN Shao-chun;ZOU Zhi-rong;LI Guo-ping;YE Pin;FAN Yan;LI Yue-min.Persistant and Stable Over-Expression of Gnaq in SH-SY5Y Cell Line by Means of Lentivector Transfection Technique[J].Journal of Kunming Medical College,2013,34(7):4-7. |
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| Authors: | CHEN Shao-chun;ZOU Zhi-rong;LI Guo-ping;YE Pin;FAN Yan;LI Yue-min |
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| Institution: | CHEN Shao-chun;ZOU Zhi-rong;LI Guo-ping;YE Pin;FAN Yan;LI Yue-min;Dept. of Anatomy and Histoembryology,Kunming Medical University;Dept. of Head and Neck Surgery,The 3rd Affiliated Hospital,Kunming Medical University; |
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| Abstract: | |
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