| 人肿瘤抗原基因Delta-like4(DLL4)可溶性表达、纯化及鉴定 |
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| 作者姓名： | 刘建军 胡月新 焦扬 赵瑜 杨静 何保丽 |
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| 作者单位： | 刘建军 (昆明医科大学分子临床医学研究院,云南昆明,650500)； 胡月新 (昆明医科大学科研实验中心,云南昆明,650500)； 焦扬 (昆明医科大学分子临床医学研究院,云南昆明,650500)； 赵瑜 (昆明医科大学生物医学工程研究中心,云南昆明,650500)； 杨静 (昆明医科大学分子临床医学研究院,云南昆明,650500)； 何保丽 (昆明医科大学动物学部,云南昆明,650500)； |
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| 基金项目： | 云南省高校药学重点实验室项目(项目编号：2011YXZD01) |
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| 摘 要： | 目的研究克隆肿瘤抗原人DLL4基因,与原核表达载体可溶性融合表达、分离纯化及其鉴定,并计划将其应用于DLL4特异性肺癌肿瘤疫苗研究过程中的抗血清滴度检测.方法采用PCR方法扩增DLL4多核苷酸序列,克隆入pMD-18T载体.测序正确后,将其亚克隆入pGEX-KG原核表达载体,获得pGEX-KG-hDLL4载体.以该载体转化E.coli菌株BL21(DE3),IPTG诱导其表达,裂解大肠杆菌,以GSTrap亲和层析柱纯化目的蛋白,采用SDS-PAGE电泳,Western Blot方法鉴定目的蛋白的表达.结果 PCR扩增获得了hDLL4基因片段,经测序证实与GenBank公布的序列一致,重组的质粒经过PCR、酶切鉴定,证明重组质粒中已成功的插入了目的基因hDLL4.成功构建了该蛋白的原核表达载体pGEX-KG-hDLL4.结论融合蛋白GST-hDLL4在25℃,IPTG终浓度0.5 mmol/L条件下诱导表达,以GSTrap亲和层析柱纯化,获得纯化融合蛋白.采用SDS-PAGE,Western Blot的方法可检测到目的可溶性融合蛋白GST-hDLL4的表达.
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| 关 键 词： | DLL4 原核表达 亲和层析 融合蛋白 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
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