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| 细菌内同源重组构建含人内皮抑素基因腺病毒及在胃癌细胞中的体外转染实验 | |
| 引用本文： | 阴忆青,齐荣,邹卫国,秦新裕,刘新垣.细菌内同源重组构建含人内皮抑素基因腺病毒及在胃癌细胞中的体外转染实验[J].中国临床医学,2003,10(2):139-142. |
| 作者姓名： | 阴忆青 齐荣 邹卫国 秦新裕 刘新垣 |
| 作者单位： | 1. 复旦大学附属中山医院普外科,上海,200032 2. 上海交通大学生命科学技术学院,上海,200030 3. 中国科学院上海生命科学研究院,生物化学与细胞研究所,上海,200031 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No .3 0 12 0 160 82 3 )，国家“863”高科技项目 (No .2 0 0 1AA2 170 3 1)资助 |
| 摘 要： | 目的 :采用细菌内同源重组法构建含人内皮抑素基因的重组腺病毒Ad -CMV -hEn。方法 :将hEn基因自 pCA13-hEn质粒中酶切下来 ,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成转移质粒 pAdtrack -CMV -hEn ,并用PmeⅠ线性化后与腺病毒基因组质粒 pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5 183,抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA ,PacⅠ酶切后在 2 93细胞中包装成腺病毒颗粒。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定 ,同时测定了病毒滴度。并采用RT -PCR检测感染腺病毒的胃癌细胞内有无hEnmRNA的转录。结果 :由 pAdtrack -CMV -hEn和pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5 183后 ,可得到阳性重组体细菌克隆 ,包装完成的腺病毒经PCR检测表明已含有hEn基因。纯化所得腺病毒滴度约为 2 .4× 10 11pfu /ml。RT -PCR证实在感染重组体腺病毒Ad .CMV -hEN的细胞中有相应mRNA的转录。结论 :细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法。所构建的Ad -CMV -hEn在体外能有效转录相应的mRNA。 |
| 关 键 词： | 腺病毒载体 内皮抑素 胃癌 基因治疗 细菌内同源重组法 |
Constructing Recombinant Adenovirus Expressing Human Endostatin Gene by Homologous Recombination in Bacteria |
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| Yin Yiqing Qi Rong Zou Weiguo ,et al..Constructing Recombinant Adenovirus Expressing Human Endostatin Gene by Homologous Recombination in Bacteria[J].Chinese Journal Of Clinical Medicine,2003,10(2):139-142. | |
| Authors: | Yin Yiqing Qi Rong Zou Weiguo |
| Institution: | Yin Yiqing 1 Qi Rong 3 Zou Weiguo 2,et al. |
| Abstract: | |
| Keywords: | Adenovirus vector Endostatin Stomach neoplasm Gene therapy Bacteria |
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