| 人MMP-11原核表达载体pGEX-5X-3/MMP-11的构建及其融合蛋白的表达和纯化 |
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| 引用本文： | 郑晶,陆惠玲,刘加军,陈森,吕德坚,孙宏钰.人MMP-11原核表达载体pGEX-5X-3/MMP-11的构建及其融合蛋白的表达和纯化[J].热带医学杂志,2006,6(3):231-235. |
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| 作者姓名： | 郑晶 陆惠玲 刘加军 陈森 吕德坚 孙宏钰 |
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| 作者单位： | 1. 中山大学基础医学院法医物证学教研室,广州,510080
2. 中山大学附属第三医院血液肿瘤科,广州,510630 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.30471933)。 |
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| 摘 要： | 目的构建表达人基质金属蛋白酶-11(MMP-11)N-端肽段的重组原核表达载体pGEX-5X-3/MMP-11,获得人源性MMP-11融合蛋白。方法应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从正常人子宫内膜组织扩增目的基因片段,利用体外基因重组技术将目的基因片段连接到原核表达载体pGEX-5X-3上构成重组的原核表达载体pGEX-5X-3/MMP-11,并通过酶切和测序进行鉴定。将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,用异丙基硫代半乳糖苷诱导其融合蛋白的表达并进行纯化。结果RT-PCR获得预期大小的特异性DNA片段,经双酶切鉴定及测序证实已将人基质金属蛋白酶-11N-端肽段的cDNA片段正确插入原核表达载体中。融合表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,证实相对分子量大小为4550。结论成功构建了表达人MMP-11N-端肽段的重组原核表达载体pGEX-5X-3/MMP-11,获得相对分子量为4550的GST-MMP-11融合蛋白,为进一步制备抗人MMP-11抗体及其在临床中进一步推广应用于恶性肿瘤的快速诊断及临床疗效的评价奠定了基础。
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| 关 键 词： | 基因重组 基质金属蛋白酶-11 表达与纯化 原核表达载体 |
| 文章编号： | 1672-3619（2006）03-0231-05 |
| 收稿时间： | 2005-10-08 |
| 修稿时间： | 2005-12-09 |
Construction and Characterization of the Recombinant Prokaryotic Vector pGEX-5X-3/MMP-11 |
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| ZHENG Jing,LU Hui-ling,LIU Jia-jun,CHEN Sen,L De-jian,SUN Hong-yu.Construction and Characterization of the Recombinant Prokaryotic Vector pGEX-5X-3/MMP-11[J].Journal Of Tropical Medicine,2006,6(3):231-235. |
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| Authors: | ZHENG Jing LU Hui-ling LIU Jia-jun CHEN Sen L De-jian SUN Hong-yu |
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| Institution: | ZHENG Jing,LU Hui-ling,LIU Jia-jun,CHEN Sen,L(U) De-jian,SUN Hong-yu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | gene recombination matrix metalloproteinase-11 expression and purification prokaryotic expressing vector |
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