| PNPLA3基因表达以及干扰腺病毒的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 乔爱君,方福德,常永生.PNPLA3基因表达以及干扰腺病毒的构建及鉴定[J].基础医学与临床,2011,31(5). |
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| 作者姓名： | 乔爱君 方福德 常永生 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院,基础医学研究所,北京协和医学院,基础学院,医学分子生物学国家重点实验室,北京,100005 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划项目(973计划)，国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 构建糖脂代谢和脂肪肝相关基因PNPLA3过表达以及干扰腺病毒载体并加以鉴定.方法 根据PNPLA3基因序列设计过表达以及干扰序列引物,定向克隆人穿梭载体pAdTraek-CMV的Bgl Ⅱ和Xho I位点,干扰序列克隆人pAdTrack-U6穿梭载体,Pme I酶切线性化穿梭质粒与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共转化E.coli BJ5183感受态细菌产生重组腺病毒载体,用Pac I酶切线性化的回收质粒转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293A细胞绿色荧光蛋白的表达,并初步观察其感染小鼠原代细胞的效率.结果 测序、酶切鉴定证实,构建出了PNPL43基因过表达及干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.5×10<'11>VP/mL.以120感染复数感染小鼠肝脏原代细胞,感染效率可达到90%以上,干扰效率超过80%以上.结论 成功构建了PNPLA3基因的过表达以及干扰腺病毒载体.
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| 关 键 词： | 过表达 干扰 腺病毒 |
The adenovirus construction and identification of expression and interference of PNPLA3 gene |
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| QIAO Ai-jun,FANG Fu-de,CHANG Yong-sheng.The adenovirus construction and identification of expression and interference of PNPLA3 gene[J].Basic Medical Sciences and Clinics,2011,31(5). |
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| Authors: | QIAO Ai-jun FANG Fu-de CHANG Yong-sheng |
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| Institution: | QIAO Ai-jun,FANG Fu-de,CHANG Yong-sheng(National Laboratory of Medical Molecular Biology,Institute of Basic Medical Sciences,CAMS & PUMC,Beijing 100005,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PNPLA3 |
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