生存素小分子干扰RNA对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及生物学功能的影响

目的 探讨生存素小分子干扰RNA（siRNA）对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响。方法 培养的A431细胞分为3组：生存素siRNA组、阴性对照组和空白对照组，分别用50.0 nmol/L脂质体包裹的生存素基因序列特异性siRNA、无关序列siRNA阴性脂质体及预制囊泡转染。实时定量反转录-聚合酶链反应（RT?PCR）、Western印迹法分别检测A431细胞生存素mRNA及蛋白的表达。采用MTT比色法检测细胞增殖，流式细胞仪膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭双染法检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭力，流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 转染后48 h，生存素siRNA组、阴性对照组、空白对照组A431细胞中生存素mRNA水平分别为0.56 ± 0.15、0.88 ± 0.37、0.90 ± 0.43，蛋白表达水平分别为0.59 ± 0.04、0.86 ± 0.05、0.91 ± 0.07，差异均有统计学意义（F = 276.67、243.61，均P < 0.001），且生存素siRNA组生存素mRNA和蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和空白对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05），而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（均P > 0.05）。重复测量方差分析显示，转染生存素siRNA能抑制A431细胞增殖（F = 13.19，P = 0.004），且生存素siRNA组A431细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组（均P < 0.05），而阴性对照组与空白对照组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。转染后24 h， 3组间A431细胞凋亡率差异有统计学意义（F = 83.97，P = 0.002），且生存素siRNA组A431细胞凋亡率显著高于阴性对照组（P < 0.05）和空白对照组（P < 0.05），而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（P > 0.05）。转染后48 h，生存素siRNA组G2/M期细胞比例显著高于阴性对照组（P < 0.05）和空白对照组（P < 0.05），而生存素siRNA组A431细胞迁移数及侵袭数均显著低于空白对照组（均P < 0.05）和阴性对照组（均P < 0.05）。结论 生存素序列特异性siRNA能抑制A431细胞生存素基因表达和细胞增殖，促进细胞凋亡，抑制细胞迁移和侵袭，提示生存素可成为皮肤鳞状细胞癌基因治疗的靶点。

Effect of small interfering RNA targeting survivin gene on the of survivin and biological function of a human cutaneous squamous cell carcinoma cell line A431