蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号转导通路抑制酒精性肝纤维化作用及其机制

目的:研究不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝组织中Nrf2/γ-GCS信号转导通路的影响，探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:健康Wistar 大鼠随机分为8组:正常组、模型对照组、先水后醇60%提取方案组(0.09 mg.kg^-1.d^-1)、先水后醇95%提取方案中、高剂量组(2.59 g.kg^-1.d^-1、8.2 g.kg^-1.d^-1)、水提醇沉中、高剂量组(2.59 g.kg^-1.d^-1、8.2 g.kg^-1.d^-1)及复方鳖甲软肝片组(0.09 mg.kg^-1.d^-1)，每组10只大鼠。酒精性肝纤维化大鼠模型制备成功后，各组按相应药物剂量分别开始治疗，正常组和模型组给予同体积蒸馏水，每日1 次，造模10周后处死大鼠，留取标本。酸水解法测定肝组织中胶原蛋白含量； Western blotting 检测肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达；光镜观察肝组织免疫组化染色结果。结果:(1) 肝组织中羟脯氨酸含量:与正常组比较，模型组大鼠肝组织胶原蛋白含量增高 (P<0.01)；与模型组比较，先水后醇60%提取方案组、先水后醇中、高剂量组以及复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织胶原含量均降低 (P<0.05)。(2) 肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达:与正常组比较，模型组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高 (P<0.01)；与模型组比较，各治疗组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高 (P<0.01)。(3) 肝组织免疫组化染色结果: 模型组的Nrf2和γ-GCS蛋白主要在细胞浆中表达，各用药组Nrf2和γ-GCS蛋白均多数在细胞浆和细胞核中表达，汇管区附近也有所表达，但表达量不及胞浆和胞核。结论:提取工艺优化后的蒿鳖养阴软坚方可能通过上调肝组织Nrf2/γ-GCS信号转导通路，增加Nrf2蛋白和γ-GCS蛋白的表达，降低大鼠肝组织肝纤维化程度从而发挥抗肝纤维化的作用。