| 含产气荚膜梭菌肠毒素基因重组质粒pET-28a-CPE的构建和表达 |
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| 引用本文： | 毕罡,靳风烁,吴刚,李彦锋,李黔生,张克勤,孙中义.含产气荚膜梭菌肠毒素基因重组质粒pET-28a-CPE的构建和表达[J].重庆医学,2008,37(21). |
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| 作者姓名： | 毕罡 靳风烁 吴刚 李彦锋 李黔生 张克勤 孙中义 |
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| 作者单位： | 第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，第三军医大学校科研和教改项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建含全长产气荚膜梭菌肠毒素(CPE)基因的重组表达质粒pET-28a-CPE并进行原核表达.方法 培养并提取表达肠毒素的产气荚膜梭菌标准菌株64615的基因组DNA,PCR扩增出全长CPE基因片段并连接入pET-28a载体质粒中,构建重组原核表达质粒pET-28a-CPE,进行酶切及测序鉴定,并转化入感受态大肠杆菌(E.coli)BL21中,用IPTG诱导CPE表达.结果 复苏、培养成功产肠毒素的产气荚膜梭菌标准菌株64615,成功构建了表达质粒pET-28a-CPE,经酶切及测序鉴定结果 与设计的完全相符,成功用E.coil BL21进行了原核表达,目的 蛋白CPE占总表达蛋白45.37%.结论 本实验成功构建并表达了含CPE的重组质粒pET-28a-CPE,为进一步观察CPE时前列腺肿瘤等的生物学作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | 产气荚膜梭菌肠毒素 表达 pET-28a 前列腺癌 |
Construction and expression of the recombinant prokaryotic plasmid pET-28a-CPE |
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| BI Gang,JIN Feng-shuo,WU Gang,et al..Construction and expression of the recombinant prokaryotic plasmid pET-28a-CPE[J].Chongqing Medical Journal,2008,37(21). |
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| Authors: | BI Gang JIN Feng-shuo WU Gang |
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| Institution: | BI Gang,JIN Feng-shuo,WU Gang,et al.(Department of Urology,Institute of Surgery Research,Daping Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400042,China) |
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| Abstract: | Objective To construct and express a recombinant prokaryotic plasmid pET-28a-CPE.Methods The standard Clostridium perfringens 64615 strain which could produce Clostridium perfringens enterotoxin(CPE) was incubated and identified.The full-length gene of CPE was extracted and amplified from the whole-length DNA of the Cl.Perfringens,and it was correctly subcloned into the vector pET-28a by restriction endonuclease digestion with NdeI plus XhoI.After inverting into competent E.coli BL21,recombinant plasmid pET... |
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| Keywords: | pET-28a |
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