尼帕病毒N基因的原核表达

目的利用尼帕病毒(NiV)的N基因进行原核表达,探讨NiV N蛋白作为检测NiV存在的抗原的可能性。方法利用pET-28a(+)作为表达载体,构建pET-NiV N重组质粒,通过IPTG诱导使其表达蛋白,并用Western blot方法进行原核表达NiV N蛋白的检测。结果通过PCR、酶切和连接反应,成功构建N蛋白的pET-NiV N重组质粒,大小为1596 bp;利用IPTG诱导pET-NiV N重组质粒在宿主菌中表达N蛋白,SDS-PAGE结果显示,55 k D有特异蛋白条带,与蛋白预计大小相符,经Bandscan软件扫描分析,重组蛋白量占菌体总蛋白量的12%;Western blot法检测显示,55 k D的条带显色良好,证明是本实验所需要得到的目的蛋白。结论使用原核表达系统成功表达了NiV的N蛋白,为其进一步的抗体制备、活性鉴定及研究应用奠定了基础。