| 细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95构建及其在根癌农杆菌LBA4404中表达效率的研究 |
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| 引用本文： | 周辉,李文桂,叶艳菊. 细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95构建及其在根癌农杆菌LBA4404中表达效率的研究[J]. 重庆医科大学学报, 2009, 34(8) |
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| 作者姓名： | 周辉 李文桂 叶艳菊 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95,分析其在根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株中的表达效率.方法:从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA,采用RT-PCR方法扩增Eg95编码基因,将该基因定向克隆到植物表达载体pBI121中构建pBI-Eg95重组质粒;电穿孔转化At(LBA4404),抽提质粒进行酶切及PCR鉴定.用IPTG分别诱导rAt 0、1、3、5、7、9、11和13h.用SDS-PAGE和Western blot鉴定所表达的蛋白质.结果:471bp Eg95基因克隆成功.经酶切及PCR证实重组质粒pBI-Eg95成功转入At(LBA4404).用Bio-Rad Quantity one分析系统分析,表达产物分子质量(Mr)约为16.5 kD,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别,表达效率为约占LBA4404菌体总蛋白的20%.结论:成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95,且能在At(LBA4404)中表达,为进一步研究细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 细粒棘球绦虫 重组质粒pBI-Eg95 根癌农杆菌 构建 表达效率 |
Construction and expression efficiency of the recombinant plasmid pBI-Eg95 of Echinococcus granulosus in the agrobacterium tumefaciens LBA4404 strain |
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