| DNA聚合酶γ的提取、纯化和鉴定 |
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| 引用本文： | 张颖慧,林菊生,李岩,高琳琳,王晓燕.DNA聚合酶γ的提取、纯化和鉴定[J].世界华人消化杂志,2007,15(35). |
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| 作者姓名： | 张颖慧 林菊生 李岩 高琳琳 王晓燕 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,湖北省武汉市,430030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，No．30330680~~ |
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| 摘 要： | 目的:提取并纯化人宫颈癌细胞(HeLa)的线粒体DNA聚合酶γ(DNA polymeraseγ,Polγ),鉴定其纯度和活性.方法:运用离子交换层析等方法提取纯化HeLa细胞的线粒体Polγ,并用Bradford法检测蛋白浓度.经SDS-PAGE检测蛋白纯度和相对分子量,Western blotting验证蛋白.用α-~(32)P- dTTP掺入法,液体闪烁计数器进行放射性测量以确定Polγ的活性.结果:成功提取并纯化HeLa细胞的线粒体Polγ,经SDS-PAGE鉴定,有一个大约140 kDa的亚基单位,Western blotting证实为Polγ.对其进行150倍纯化,收得率为6%,酶的总活力为4.81 U,比活力为36.17 U/mg.结论:HeLa细胞的线粒体Polγ通过离子交换层析法提取和纯化后活性较高,可用于体外药物线粒体毒性的检测.
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| 关 键 词： | 人官颈癌细胞 DNA聚合酶γ 线粒体 离子交换层析 |
Isolation, purification and identification of DNA polymerase gamma |
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| Ying-Hui Zhang,Ju-Sheng Lin,Yan Li,Lin-Lin Gao,Xiao-Yan Wang.Isolation, purification and identification of DNA polymerase gamma[J].World Chinese Journal of Digestology,2007,15(35). |
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| Authors: | Ying-Hui Zhang Ju-Sheng Lin Yan Li Lin-Lin Gao Xiao-Yan Wang |
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