总25-羟基维生素D磁微粒化学发光免疫分析法的建立及性能评价

目的建立一种定量测定人血清中总25-羟基维生素D(25-OH VD)含量的磁微粒化学发光免疫分析法。方法使用竞争法,样本中的25-OH VD与生物素化25-OH VD衍生物共同竞争结合碱性磷酸酶标记的25-OH VD单克隆抗体,生物素化25-OH VD衍生物再结合链霉亲和素磁珠,形成抗体-抗原衍生物-磁珠的复合物,通过检测复合物的光信号来测定样本中25-OH VD的浓度。并对建立的方法进行准确度、精密度、线性、干扰、稳定性以及方法比对等性能评价。结果建立的方法准确度偏差小于10%;批内和批间精密度均小于10%;在3.17～98.75 ng/m L之间测量值与靶值线性良好;生物素浓度不大于250 nmol/L、三酰甘油浓度不大于1 500 mg/d L、血红蛋白浓度不大于1 500 mg/d L、胆红素浓度不大于200 mg/d L时,对样本检测不产生明显干扰作用; 25-OH VD磁微粒化学发光免疫分析法试剂在4℃条件下21 d内具有较好的稳定性。与Immunodiagnostic Systems公司25-OH VD检测试剂盒(ELISA法)同时测定200例临床样本,回归方程为Y=1.006 2 X-0.166 3,r~2=0.979 2。结论建立的方法可定量测定25-OH VD,具有良好的性能,可以满足临床需求。