| 重组人颗粒溶素的纯化及其单克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 居军,李新立,王晚霞,徐向红,马亚茹,李萍,谢溱.重组人颗粒溶素的纯化及其单克隆抗体的制备[J].细胞与分子免疫学杂志,2010,26(6). |
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| 作者姓名： | 居军 李新立 王晚霞 徐向红 马亚茹 李萍 谢溱 |
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| 摘 要： | 目的:纯化原核系统表达的颗粒溶素(GNLY),并制备其单克隆抗体(mAb)。方法:用Ni亲和层析纯化重组人GNLY,用其免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备相应的mAb。mAb纯化后,用间接ELISA法测mAb的效价,ELISA相加试验测定抗原表位,硫氰酸盐洗脱法测定mAb的相对亲和力指数,并进行Ig亚类、特异性及杂交瘤细胞分泌mAb的稳定性检测。结果:经Ni亲和层析纯化的可溶性GN-LY融合蛋白,其纯度和含量分别为95%和0.8g/L。共筛选出能稳定分泌抗人GNLYmAb的杂交瘤细胞4株,分别为6C8、9C6、5G7和5E5。4株杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb的效价分别为1∶100～1∶3200和(0.1～8)×10-4,5E5mAb的Ig亚类为IgM,其余3株mAb均为IgG1。结论:成功地纯化人GNLY融合蛋白。以其为免疫原制备的鼠抗人GN-LYmAb,为实验室及临床研究奠定了一定的基础。
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| 关 键 词： | 颗粒溶素 纯化 单克隆抗体 |
The purification of recombinated granulysin and the preparation of its monoclonal antibody |
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| JU Jun,LI Xin-li,WANG Wan-xia,XU Xiang-hong,MA Ya-ru,LI Ping,XIE Zhen.The purification of recombinated granulysin and the preparation of its monoclonal antibody[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2010,26(6). |
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| Authors: | JU Jun LI Xin-li WANG Wan-xia XU Xiang-hong MA Ya-ru LI Ping XIE Zhen |
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