王不留行黄酮苷通过NLRP3/Caspase-1 信号通路抑制ox-LDL诱导的细胞焦亡

[目的] 探讨王不留行黄酮苷对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)损伤的保护作用及作用机制。[方法] 以ox-LDL(100 μg·mL-1)刺激HUVECs建立模型。采用细胞增殖活性检测(cell counting kit-8，CCK-8)法检测1～10 μmol·L-1王不留行黄酮苷对ox-LDL诱导的HUVECs的保护作用；采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)法检测LDH的释放；采用Annexin Ⅴ-FITC/碘化丙啶(propidium iodide，PI)凋亡试剂盒检测细胞凋亡；使用2’，7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’，7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate，DCFD-A)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平；采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction，Real-time PCR)检测白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattracctant protein-1，MCP-1)、人血管内皮细胞黏附分子-1(human vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)的mRNA表达；采用免疫印迹法检测B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bcl-2 associated X protein，Bax)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3)、胱天蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1，caspase-1)、裂解的胱天蛋白酶-1(cleaved caspase-1)、IL-1β和IL-18的蛋白表达。[结果] 1～10 μg·mL -1王不留行黄酮苷减轻100 μg·mL-1的ox-LDL诱导的HUVECs损伤(P<0.05，P<0.01)。王不留行黄酮苷减轻ox-LDL诱导的LDH释放，减少细胞凋亡，同时促进Bcl-2蛋白表达，抑制Bax蛋白表达(P<0.01)。王不留行黄酮苷显著减少了ox-LDL诱导的ROS生成，抑制ox-LDL诱导的炎症因子IL-6、MCP-1和VCAM-1的水平(P<0.01)。王不留行黄酮苷抑制了ox-LDL诱导的NLRP3炎症小体介导的焦亡相关蛋白表达(P<0.05，P<0.01)。[结论] 王不留行黄酮苷能够减轻ox-LDL诱导的HUVECs凋亡，缓解炎症反应，其机制可能与NLRP3介导的焦亡有关。

Vaccarin Attenuated Ox-LDL-induced HUVECs Pyroptosis by Suppressing NLRP3/Caspase-1 Signaling Pathway