抗人BPI23单克隆抗体的制备和鉴定

目的 采用杂交瘤技术制备抗人BPI23单克隆抗体，并对其应用进行初步分析。方法 免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞按常规方法融合；用间接ELISA法和Western - blot筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株；阳性克隆用有限稀释法亚克隆3次获得稳定分泌抗人BPI23单克隆抗体的杂交瘤细胞株；扩增杂交瘤细胞注入小鼠腹腔后制备腹水；纯化腹水中的单抗并对抗体类型进行鉴定；用Western-blot分析抗体的特异性；用间接ELISA法测抗体效价；将分离纯化的正常人外周血中性粒细胞和单个核细胞制成涂片,用抗人BPI23单克隆抗体进行免疫染色。结果 获得3个（1B4、9C12和2H11）稳定分泌抗人BPI23单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所分泌的单抗类型分别为κ型IgM、κ型IgG1和κ型IgG1；抗体效价分别为1.28×105、1.28×105和4.1×106，纯化后抗体含量分别为0.208g/L、2.03g/L和3.88g/L；3种纯化抗体均能与本实验制备的人BPI23和市售人BPI55标准品特异性结合，而不能与小鼠BPI25和人LBP结合；在免疫组化实验中，1B4、9C12和2H11单抗均能与人中性粒细胞中的BPI特异性结合。结论 成功制备了人BPI23特异性单克隆抗体，为BPI检测试剂盒的研制奠定了基础。

Preparation and identification of anti-human BPI23 monoclonal antibody