肝癌Huh7干细胞样细胞的富集培养及鉴定

目的：建立一种体外有效富集、培养和鉴定具有肝癌干细胞特征的细胞亚群的方法。方法：采用成球培养法利用肿瘤干细胞样细胞（cancer stem cell, CSC）分化培养基对肝癌Huh7细胞进行富集培养，获得的干细胞样细胞于体外进一步扩增获得肝癌干细胞球。流式细胞术检测Huh7干细胞样细胞表面肿瘤干细胞标志物EpCAM、CD90和CD133的表达，平板克隆集落形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测Huh7细胞和Huh7干细胞样细胞的克隆集落形成能力、体内成瘤能力。结果：Huh7细胞成球培养3~7 d后即可形成肝癌干细胞样细胞球，获得的干细胞样细胞具有自我更新和增殖能力，其EpCAM阳性细胞比例较Huh7细胞明显增加\（99.6%±0.31）% vs（0.12%±0.05）%，P<0.01\]，但两种细胞CD90\(0.11%±0.06)% vs (0.09%±0.07)%, P>0.05\]和CD133\(0.17%±0.08)% vs (0.15%±0.05)%， P>0.05]表达差异无统计学意义。Huh7干细胞样细胞克隆集落形成数量明显多于Huh7细胞\（188.67±12.5）vs （79±16.7）个，P<0.01\]；当接种量为5×104个细胞时，与接种Huh7细胞的对照裸鼠相比，接种Huh7干细胞样细胞的裸鼠成瘤时间更短（11 vs 30 d），成瘤率更高（100% vs 16.67%）；接种5×105数量级的细胞时，实验组成瘤体积\（171.90±10.94）vs（86.39±11.21）mm3, P<0.01\]和瘤体质量\（2.98±0.82）vs（0.32±0.17）g, P<0.01\]均明显大于对照组。结论：利用成球培养法能够从Huh7肝癌细胞系中富集培养获得Huh7肝癌干细胞，其具有比Huh7细胞更强的成瘤能力。

Culture and identification of liver cancer stem cell-like Huh7 cells