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| 特异结合人禽流感病毒H5N1的scFv分子性能鉴定 | |
| 引用本文： | 武婕,张宏斌,柯昌文,陈秋霞,李晖,周杰,黄吉城,张欣,邹丽容.特异结合人禽流感病毒H5N1的scFv分子性能鉴定[J].医学分子生物学杂志,2011,8(4). |
| 作者姓名： | 武婕 张宏斌 柯昌文 陈秋霞 李晖 周杰 黄吉城 张欣 邹丽容 |
| 作者单位： | 1. 广东省疾病预防控制中心病原微生物所,广州市,510300 2. 广州军区广州总医院医学实验科,广州市,510010 3. 广东出入境检验检疫局技术中心,广州市,510623 |
| 基金项目： | 国家质检总局科技计划项目 |
| 摘 要： | 目的 从人源化噬菌体抗体库(human single fold scFv libraries I+J)中筛选到能高亲和性、特异结合人禽流感病毒H5N1的单链抗体,为建立H5N1快速筛查试剂和人源化治疗单抗奠定基础.方法 以H5N1病毒的血凝素(hemagglutitin,HA)蛋白和核蛋白(nucleoprotein,NP)为目的 蛋白,对上述单抗噬菌体文库以亲和性为原理进行筛选,经过3轮筛选富集后,随机挑选了96个噬菌体克隆扩增培养,ELISA法挑选能特异性、高亲和性结合目的 蛋白的噬菌体克隆,并换用HB2151宿主菌对阳性单链抗体克隆进行可溶性表达,ELISA法鉴定可溶性单链抗体的结合活性,PCR扩增阳性克隆的轻、重链基因片段,并对阳性单链抗体分子测序和序列分析.结果 经过3轮筛选,分别从96个噬菌体克隆中挑选到了两株能特异结合NP蛋白、3株能特异结合HA蛋白的单链抗体,PCR扩增都得到了长为300、302和935 bp的轻链、重链和轻链-连接片段-重链的基因片段,测序结果分析发现上述5条单链抗体片段在轻链的47、49、50、51、53、54、56、96、97、98和99位的氨基酸组成不同,而特异结合NP蛋白的单链在重链区域氨基酸组成完全相同,而特异结合HA蛋白的单链在重链的44、47、85、86、87、88和89位氨基酸组成不同.结论 从噬菌体抗体库中筛选到的特异结合HA和NP蛋白的单链抗体片段,可为进一步研发H5N1快速筛选试剂和人源性治疗抗体奠定基础,也可为鉴定HA和NP蛋白中的抗原决定簇提供结构信息. |
| 关 键 词： | 人禽流感病毒H5N1 人源化单链抗体 噬菌体文库 构建 筛选 |
Screening and Detection of scFV Fragments Specific to HA and NP Proteins of H5N1 Virus |
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| WU Jie,ZHANG Hongbin,KE Changwen,CHEN Qiuxia,LIHui,ZHOU Jie,HUANG Jicheng,ZHANG Xin,ZOU Lirong.Screening and Detection of scFV Fragments Specific to HA and NP Proteins of H5N1 Virus[J].Journal of Medical Molecular Biology,2011,8(4). | |
| Authors: | WU Jie ZHANG Hongbin KE Changwen CHEN Qiuxia LIHui ZHOU Jie HUANG Jicheng ZHANG Xin ZOU Lirong |
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