下调NAD（P）H氧化酶4加重缺氧复氧心肌细胞损伤：线粒体SIRT3信号的关键作用

目的明确内源性NAD（P）H氧化酶4（Nox4）在心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤中的作用并探讨其可能的机制。方法：以H，C2心肌细胞系为研究对象，建立H／R模型，将细胞分为对照组、NC-siRNA组、Nox4-siRNA组、H／R组、H／R＋NC-siRNA组和H／R＋Nox4-siRNA组。采用RNAi方法下调Nox4的表达，MTT比色法测定相对存活率、荧光素酶化学发光法测量ATP水平，MitoSOX荧光探针检测线粒体ROS，比色法测定NAD＋／NADH的比值，Western blot法测定Nox4和SIRT3表达水平。结果：与对照组相比，H／R组H。c，心肌细胞中Nox4蛋白的水平明显增加（P〈0．05），相对存活率、ATP的水平明显降低（P〈0．05，P〈0．01），而线粒体ROS生成明显增加（P〈0．01），同时NAD＋／NADH的比值明显增加、SIRT3表达量明显降低（P〈0．05，P〈0．01）。与H／R组相比，H／R＋Nox4-siRNA组Nox4蛋白水平显著降低（P〈0．05），相对存活率、ATP的水平进一步降低、线粒体ROS生成进一步增加（P〈0．05），同时，NAD＋／NADH的比值明显降低（P〈0．01）、SIRT3蛋白水平进一步降低（P〈0．05）。结论：下调Nox4可加重H／R诱导的心肌细胞损伤和氧化应激，抑制线粒体能量生成，其心肌细胞保护机制可能是通过上调NAD＋／NADH的比值，增加SIRT3的表达而发挥作用。