| 热休克蛋白90β(HSP90β)真核表达载体的构建及体外表达 |
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| 引用本文： | 刘涛,赵菊梅,梁传余,田聆,魏于全.热休克蛋白90β(HSP90β)真核表达载体的构建及体外表达[J].中国耳鼻咽喉颅底外科杂志,2005,11(5):305-310. |
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| 作者姓名： | 刘涛 赵菊梅 梁传余 田聆 魏于全 |
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| 作者单位： | 1. 四川大学华西医院,耳鼻咽喉科,四川,成都,610041
2. 四川大学华西医院,肿瘤生物治疗研究中心·人类疾病生物治疗教育部重点实验室,四川,成都,610041 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30270524）. |
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| 摘 要： | 目的克隆人热休克蛋白90β(HSP90β)基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1( )/hHSP90β,并检测其在体外的表达情况,为下一步研究鼻咽癌中HSP90β功能奠定基础。方法提取鼻咽癌总RNA,并经RT-PCR获得hHSP90βcDNA。用纯化的hHSP90βcDNA与PGEM Easy T Vector连接,构建中间载体PGEM-hHSP90β。将PGEM-hHSP90β及pcDNA3.1( )质粒经AflII和Xbal双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,构建hHSP90β真核表达载体pcDNA3.1( )/hHSP90β。经酶切和测序后,用脂质体包裹转染COS细胞,采用RT-PCR和Western blot检测HSP90β的表达。结果酶切及测序鉴定表明,hHSP90β与pcDNA3.1( )体外重组成功,命名为pcDNA3.1( )/hHSP90β。该表达质粒在体外转染COS细胞后可表达HSP90β分子。结论采用体外重组技术,成功地将人HSP90β插到了真核表达载体pcDNA3.1( )中;pcDNA3.1( )/hHSP90β表达质粒能在体外表达HSP90β分子。
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| 关 键 词： | 鼻咽肿瘤/遗传学 热休克蛋白90β(HSP90β) 真核表达载体 质粒pcDNA3.1( ) |
| 文章编号： | 1007-1520（2005）05-0305-06 |
| 修稿时间： | 2005-09-12 |
Construction of pcDNA3.1(+)/hHSP90β plasmid and its expression in eukaryote cells |
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| LIU Tao,ZHAO Ju-mei,LIANG Chuan-yu.Construction of pcDNA3.1(+)/hHSP90β plasmid and its expression in eukaryote cells[J].Chinese Journal of Otorhinolaryngology-skull Base Surgery,2005,11(5):305-310. |
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| Authors: | LIU Tao ZHAO Ju-mei LIANG Chuan-yu |
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