慢病毒RNAi载体的制备及滴度测定方法的建立 |
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作者姓名: | 杨靖 宋波 赵国强 王茜 韩志强 许予明 |
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作者单位: | 郑州大学第一附属医院,郑州450052 |
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基金项目: | 河南省教育厅自然科学基础研究计划项目资助课题 |
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摘 要: | 目的构建可用于神经系统基因功能研究和基因治疗的慢病毒RNAi载体系统,并建立一种方便、快捷的慢病毒滴度测定方法。方法三质粒系统:PLK0.1-puro、△8.2、水疱性口炎病毒G糖蛋白(VSV-G)共转染293T细胞,产生慢病毒RNAi载体颗粒,超速冷冻离心浓缩;将病毒颗粒进行系列稀释后感染Eca9706细胞,采用嘌呤霉素最小致死量筛选病毒感染细胞的方法,进行慢病毒滴度测定。结果完成了慢病毒RNAi载体的包装及浓缩,确定了嘌呤霉素对Eca9706细胞的最小致死浓度为2.7μg/ml,并应用该浓度测得病毒颗粒的滴度为10^7TU/ml。结论成功构建了一种慢病毒RNAi载体,并建立了一种可行的慢病毒滴度测定方法。
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关 键 词: | 慢病毒载体 RNA干扰 滴度测定 嘌呤霉素 |
修稿时间: | 2007-03-18 |
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