人结肠癌细胞HT-29离体缺氧模型的制备和鉴定

目的 模拟体内肿瘤不同程度的缺氧环境,建立简单、稳定可靠的离体缺氧模型,比较各梯度缺氧对HT-29细胞生长活力的影响,以筛选出最适HT-29细胞生长的微缺氧环境.方法 制作缺氧检测装置,灌注不同氧浓度的混合气体.溶解氧测定仪实时动态监测培养液氧分压的变化;RT-PCR 检测低培养液氧分压下HT-29细胞HIF-1αmRNA的表达,以检验细胞是否处于缺氧状态;倒置相差显微镜下观察缺氧各梯度组HT-29细胞的形态变化;MTT 检测各梯度缺氧对HT-29细胞增殖的影响,描绘细胞生长曲线.结果 输入7.8%、4.8%、2.4%和1.2% 氧(O2)后20min,10%FBS/RPMI-1640培养液的氧分压(PO2)分别恒定于30、20、10和5 mmHg.缺氧各梯度组HIF-1αmRNA的表达均较对照组明显上调,尤以PO220 mmHg组为著.PO230mmHg、PO220 mmHg和PO210 mmHg梯度组HT-29细胞的形态与对照组相似;而PO25 mmHg梯度组则出现损伤性形态改变,其(A570)值最低;PO220mmHg梯度组(A570)值则显著高于对照组.结论 该实验成功构建离体缺氧模型.在适度缺氧下,缺氧的应激作用,可能使相关缺氧反应基因表达上调,诱导细胞增殖加快,通过刺激增殖和细胞保护使肿瘤细胞在缺氧环境中长期生存.而严重缺氧导致增殖受到抑制,细胞形态出现损伤性改变.在对照组和缺氧的4个梯度组中,PO220mmHg组处于缺氧的应激和损伤作用的平衡点,其生长活力最好.肿瘤瘤体内PO220mmHg位于瘤体边缘,提示:位于瘤体边缘的肿瘤细胞在缺氧的诱导下增殖活性更强.这为后续深入探讨该缺氧水平下肿瘤细胞的侵袭能力及其机制奠定了基础.

Establishment and identification of hypoxic model of human colon carcinoma cell lines HT-29