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| 小鼠NF-κ B p65亚基真核表达质粒的构建 | |
| 作者姓名： | 李雄 罗成群 周建大 贺全勇 徐阳成 彭浩 陈铁夫 欧阳华伟 |
| 作者单位： | 中国大学湘雅三医院,烧伤整形外科,湖南,长沙,410013 |
| 摘 要： | 目的 构建小鼠NF-κ B p65亚基真核表达质粒.方法 从培养的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7中提取总RNA,逆转录得到DNA,利用PCR方法钓取目的 基因,将目的 基因与目的 载体pcDNA3.1(一)分别进行酶切.酶切产物电泳回收后进行定向连接,其产物转化细菌感受态.对长出的克隆先进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,比对正确的即为构建成功的目的质粒.结果 经过PCR鉴定和酶切鉴定,证实DNA片段长度和序列正确.结论 通过RT-PCR克隆出小鼠NF-κ B p65亚基基因,并成功连接于目的载体,为进一步研究NF-κ B p65的烧伤后免疫反应中的作用机制打下实验基础. |
| 关 键 词： | 核因子κB pcDNA3.1(一) 表达质粒 |
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