依达拉奉体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化

目的 采用密度梯度离心和差速贴壁法体外分离、培养、纯化及鉴定成年Wistar大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs），利用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和依达拉奉联合诱导MSCs定向分化为神经元样细胞。 方法 选用1月龄健康雄性Wistar大鼠，采用Percoll分离液密度梯度离心法获取骨髓中的MSCs，通过差速贴壁法反复传代培养、纯化，取第3代细胞采用流式细胞术、免疫细胞化学等方法检测MSCs的纯度，利用bFGF联合依达拉奉诱导MSCs向神经元样细胞分化，并通过扫描电镜、免疫细胞化学等对诱导后的细胞进行鉴定。结果 第3代MSCs经免疫细胞化学及流式细胞仪等检测，间充质干细胞特异性的标记物CD44表达阳性，不表达造血干细胞及白细胞的特异性标记物CD34、CD45，MSCs纯度高达955%。诱导分化后扫描电镜检测可观察到典型的神经元样细胞结构；免疫细胞化学检测发现，细胞表达神经元特异性烯醇化酶（NSE），不表达胶质纤维酸性蛋白（GFAP），Nestin的表达随着细胞成熟而减弱。 结论 密度梯度离心和差速贴壁法可获得高纯度的MSCs；依达拉奉能高效地定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。