大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因的表达

目的：观察大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因表达的改变。方法：实验于2004-09／2005-06在中南大学湘雅医院神经病学实验室（实验室B级）完成。选择青龄（2月龄）健康雌性SD大鼠10只，老龄（20月龄）健康雌性SD大鼠10只。①反转录反应：反应体系20μL，取5μg（2μL）总RNA，加1g／L Oligo（dT）18 0．5μL，焦碳酸二乙酯处理过的水8．5μL，70℃保持5min，然后冰上骤冷30s，短暂离心3～5s，再加5&;#215;反转录buffer 4μL，10mmol／L dNTPMix 2μL，4U／μl Rnasin 0．5μL，焦碳酸二乙酯处理过的水1．5μL，轻轻混匀、离心3～5s，37℃保持5min，最后加200U／μL M-ulv反转录酶1μL，42℃保持1h，70℃保持10min变性，冰上冷却10min，反转录产物（cDNA）于-20℃保存备用。②聚合酶链反应：总反应体系25μL，包括10x聚合酶链反应buffer 2．5μL，25mmol／L氯化镁1．5μL，10mmol／L dNTP 1μL,2U／μL Taq酶0．5μL，上述反转录产物cDNA 2μL，50μmol／L上游目的引物0．5μL，50μmol／L下游目的引物0．5μL,ddH2O 16．5μL。各程序均采用95℃5min预变性，94℃，45s、退火温度30s，72℃ 1 min进行32个循环，最后72℃延伸10min。退火温度，去整合蛋白和金属蛋白水解酶10：62．3℃；去整合蛋白和金属蛋白水解酶17：50．2℃；肌动蛋白：46℃。取聚合酶链反应产物5μL于15g／L琼脂糖凝胶电泳，然后在凝胶图像处理系统上扫描，测定各目的基因和肌动蛋白扩增产物的吸光度值，分别计算其比值，即目的基因值：目的基因吸光度值／肌动蛋白吸光度值。结果：纳入动物20只，均进入结果分析。①老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶10的表达水平（1．2170&;#177;0．4308）低于青龄大鼠（1．5050&;#177;0.4958），但两组比较差异无显著性（t=1．239，P〉0．05）。②老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶17的表达水平（1．5720&;#177;0．5670）高于青龄大鼠（0．9740&;#177;0．3281），但两组比较差异无显著性（t=-1．476，P〉0．05）。结论：去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17的基因表达水平可能不是老龄人易发阿尔茨海默病的生物学基础。

Expression of a disintegrin and metalloprotease 10 and a disintegrin and metalloprotease 17 in hippocampus of rats