大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因的表达 |
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引用本文: | 李振国,杨期东,毛诗贤,王改青,黄晓松.大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因的表达[J].中国临床康复,2006,10(2):85-87. |
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作者姓名: | 李振国 杨期东 毛诗贤 王改青 黄晓松 |
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作者单位: | 中南大学湘雅医院神经内科,湖南省长沙市410008 |
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摘 要: | 目的:观察大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因表达的改变。方法:实验于2004-09/2005-06在中南大学湘雅医院神经病学实验室(实验室B级)完成。选择青龄(2月龄)健康雌性SD大鼠10只,老龄(20月龄)健康雌性SD大鼠10只。①反转录反应:反应体系20μL,取5μg(2μL)总RNA,加1g/L Oligo(dT)18 0.5μL,焦碳酸二乙酯处理过的水8.5μL,70℃保持5min,然后冰上骤冷30s,短暂离心3~5s,再加5&;#215;反转录buffer 4μL,10mmol/L dNTPMix 2μL,4U/μl Rnasin 0.5μL,焦碳酸二乙酯处理过的水1.5μL,轻轻混匀、离心3~5s,37℃保持5min,最后加200U/μL M-ulv反转录酶1μL,42℃保持1h,70℃保持10min变性,冰上冷却10min,反转录产物(cDNA)于-20℃保存备用。②聚合酶链反应:总反应体系25μL,包括10x聚合酶链反应buffer 2.5μL,25mmol/L氯化镁1.5μL,10mmol/L dNTP 1μL,2U/μL Taq酶0.5μL,上述反转录产物cDNA 2μL,50μmol/L上游目的引物0.5μL,50μmol/L下游目的引物0.5μL,ddH2O 16.5μL。各程序均采用95℃5min预变性,94℃,45s、退火温度30s,72℃ 1 min进行32个循环,最后72℃延伸10min。退火温度,去整合蛋白和金属蛋白水解酶10:62.3℃;去整合蛋白和金属蛋白水解酶17:50.2℃;肌动蛋白:46℃。取聚合酶链反应产物5μL于15g/L琼脂糖凝胶电泳,然后在凝胶图像处理系统上扫描,测定各目的基因和肌动蛋白扩增产物的吸光度值,分别计算其比值,即目的基因值:目的基因吸光度值/肌动蛋白吸光度值。结果:纳入动物20只,均进入结果分析。①老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶10的表达水平(1.2170&;#177;0.4308)低于青龄大鼠(1.5050&;#177;0.4958),但两组比较差异无显著性(t=1.239,P〉0.05)。②老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶17的表达水平(1.5720&;#177;0.5670)高于青龄大鼠(0.9740&;#177;0.3281),但两组比较差异无显著性(t=-1.476,P〉0.05)。结论:去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17的基因表达水平可能不是老龄人易发阿尔茨海默病的生物学基础。
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关 键 词: | 阿尔茨海默病 水解酶类 动物实验 |
收稿时间: | 11 23 2005 12:00AM |
修稿时间: | 12 5 2005 12:00AM |
Expression of a disintegrin and metalloprotease 10 and a disintegrin and metalloprotease 17 in hippocampus of rats |
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