| Hint1基因抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性的实验研究 |
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| 引用本文： | 戈佳云,王琳,陆晓青,李晓,吴涛. Hint1基因抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性的实验研究[J]. 中华普通外科杂志, 2009, 24(8). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-631X.2009.08.020 |
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| 作者姓名： | 戈佳云 王琳 陆晓青 李晓 吴涛 |
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| 作者单位： | 650101昆明医学院第二附属医院肝胆外科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，云南省自然科学基金，云南省中青年学术技术带头人后备人才基金 |
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| 摘 要： | 目的 探索体外过表达Hint1基因对人肝肿瘤HepG2细胞AP-1转录因子活性的影响.方法 分子克隆获得Hint1基因序列,构建pHA-Hint1重组融合基因表达载体.阳离子脂质体介导,pHA-Hint1转导人肝母细胞瘤HepG2细胞,RT-PCR和Western blot检测HepG2细胞中外源HA-Hint1表达.pHA-Hint1质粒、启动子荧光素酶报告质粒AP-1/Luc及巨细胞病毒-β-半乳糖酶报告质粒(β-gel)共转导HepG2细胞.36 h后测定荧光素酶活性及β-gel活性.结果 重组质粒经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切,获约100 bp特异条带,测序证实成功构建pHA-Hint1表达载体.pHA-Hint1及空载体pcDNA3/HA转导HepG2细胞,半定量RT-PCR结果显示pHA-Hint1组Hint1mRNA表达高于空载体组(t=3.89,P<0.05);Western blot结果显示pHA-Hint1组HA标签蛋白表达高于空载体组(t=3.12,P<0.05).AP-1转录因子活性检测结果:pHA-Hint1终浓度为0 μg/ml,0.5 μg/ml,1.0 μg/ml,1.5 μg/ml,2.0 μg/ml时,AP-1转录因子相对活性(106)为:5.12±0025、4.24±0.74、3.43±0.31、2.62±0.48、2.09±0.21.随着pHA-Hint1浓度增加,荧光素酶活性呈明显下降,当pHA-Hint1浓度达到1.5 μg及2.0 μg时,差异有统计学意义(F=72.009,P<0.05).结论 过表达Hint1基因可抑制HepG2细胞AP-1转录因子活性.
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| 关 键 词： | 肝肿瘤 转录因子AP-1 三组氨酸核苷结合蛋白1 |
Hint1 over expression inhibits the activity of AP-1 transcription factor in HepaG2 cells |
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| GE Jia-yun,WANG Lin,LU Xiao-qing,LI Xiao,WU Tao. Hint1 over expression inhibits the activity of AP-1 transcription factor in HepaG2 cells[J]. Chinese Journal of General Surgery, 2009, 24(8). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-631X.2009.08.020 |
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| Authors: | GE Jia-yun WANG Lin LU Xiao-qing LI Xiao WU Tao |
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